朱顶红(Hippeastrum vittatum)是单子叶亚纲石蒜科(Amaryllidaceae)植物,为朱顶红属所有种类总称,原产于墨西哥加勒比海以及阿根廷的北部。朱顶红花形优美、色泽艳丽。通过查阅文献了解到,朱顶红有较高的药用价值,其中化学成分含量丰富,包括生物碱,挥发油,糖类等多种物质,当中中的挥发油含量丰富并具有多种药理活性,具有抗菌,抗氧化,抗肿瘤,促透等功效。但挥发油这种物质由于沸点较低,提取工艺相对复杂,因而目前对朱顶红叶片中挥发油的提取与抗肿瘤等药理活性研究较少。因此,本课题以此为切入点,对朱顶红叶片中挥发油的提取进行工艺进行筛选和优化,并对提取出的挥发油进行抗肿瘤活性研究。为朱顶红叶片中挥发油提取提供理论数据也对未来拟做抗肿瘤新药的研发提供理论基础。由于挥发油的提取率通常较低,目前对朱顶红叶片中挥发油提取的研究较少,本课题首先对朱顶红叶片中挥发类成分的提取工艺进行筛选和优化。水蒸气蒸馏法、萃取法与蒸馏萃取法三种方法提取率分别为0.39%、0.89%、0.59%。萃取法提取率最高、通过正交试验可得知萃取法的最优工艺是液料比为2:1,提取温度70℃,提取时间3.5 h。将三种方法所得挥发油经气相色谱与质谱仪分析,萃取法共得到20种相似度较高的化学成分,水蒸气蒸馏13种,蒸馏萃取法14种。以萃取法提取率最高且所得化学成分最多,故后续文章所需挥发油均以萃取法来提取。在前半部分通过大量实验对提取工艺进行筛选和优化后,后半部分对朱顶红叶片中挥发类成分的抗肿瘤活性进行筛选。本课题后半部分首先采用CCK-8来检测朱顶红叶片中片中总挥发油对肝癌HepG-2细胞的增殖抑制作用。发现在2.5 mg/L-80 mg/L的范围内,朱顶红总挥发油对肝癌HepG-2细胞的增殖抑制作用随着给药浓度的增加而增强,具有增值抑制作用。在对朱顶红总挥发油进行气相色谱与质谱联用技术进行成分分析时发现,总挥发油中以棕榈酸含量最高,通过查阅文献得知,棕榈酸也具有多种药理活性。因此推测朱顶红叶片中挥发类成分的抗肿瘤活性由棕榈酸所体现,所以本课题后续对棕榈酸的抗肿瘤活性进行筛选。本课题继续采用CCK-8来检测朱顶红叶片中片总挥发油中的棕榈酸对肝癌HepG-2细胞的增殖抑制作用。发现在10umol/L-60 umol/L的范围内,朱顶红总挥发油对肝癌HepG-2细胞的增殖抑制作用随着给药浓度的增加而增强,具有增值抑制作用。根据SPSS数据分析,确定了棕榈酸对肝癌HepG-2细胞的半数抑制率IC50为42 umol/L。以所确定的半数抑制率为后续实验给药的中浓度,高浓度为80umol/L,低浓度为20 umol/L。根据课题组的前期实验可知,阳性药羟基喜树碱的半数抑制率IC50为40 umol/L。根据CCK-8实验所确定的高中低三个浓度对培养24 h后的肝癌HepG-2细胞给药,给药24 h后取出对细胞形态进行观察。在倒置显微镜下观察给药24 h后的细胞可发现给药组细胞随浓度的增大,细胞逐渐出现边界模糊,形态变圆,细胞结构破碎,细胞碎片化的现象,且浓度越大,作用时间越久,现象越明显;给药24 h的肝癌HepG-2细胞经过染色后在荧光显微镜下观察凋亡小体依次增多,细胞形态逐渐变得不规则,可见随着浓度的增加,越来越多的细胞核破碎,并随着浓度的增加细胞周围呈现出弥散状的荧光光晕。浓度越大,凋亡作用越明显。判断了棕榈酸会使肝癌HepG-2细胞产生凋亡现象后,本课题采用流式细胞仪对不同浓度给药后的肝癌HepG-2细胞进行凋亡率的检测。阳性组凋亡率为(27.746±0.13)%,空白组凋亡率为(1.174±0.27)%,高浓度组凋亡率为(36.155±0.02)%,中浓度组凋亡率为(20.316±0.18)%,低浓度组凋亡率为(5.275±0.11)%。与空白组的细胞相比,凋亡率随给药组浓度的增大而升高,具有统计学意义。综上所述,在朱顶红叶片挥发油的提取工艺研究中,萃取法有最大提取率,并且能分析出最多的组分。判断萃取法为提取朱顶红叶片中挥发油的最好方法。细胞实验中验证朱顶红叶片中总挥发油对肝癌HepG-2细胞具有增值抑制作用,朱顶红叶片总挥发油中棕榈酸对肝癌HepG-2细胞具有抗肿瘤活性。