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从该室保存的Bacillus thuringiensis(Bt)菌株中,筛选出几丁质酶高产菌株WB-7.根据已经在GenBank上登录的Bt几丁质酶基因序列设计1对引物QCL1/QCL2,用PCR方法扩增出的几丁质酶全长基因,将PCR产物直接连接到pMD-18T克隆载体上转入E.coli DH5α中克隆得到2025bp包含氨基酸全序列的几丁质酶基因,并命名为Chi7,在GenBank上的登录注册号为AY074882.利用Blast软件进行该基因的同源性分析,结果表明:chi7基因与已知的Bt和Bc几丁质酶基因都有90％以上的同源性;而与其它细菌的几丁质酶基因同源性不高,如与Bacillus subtilis、Bacillus circulans的几丁质酶基因的同源性分别为50％、52％的.将chi7基因序列翻译为Chi7蛋白质氨基酸序列,该基因编码674个氨基酸残基.利用蛋白质分析软件对Chi7蛋白进行功能结构和空间结构分析,结果表明:经在线的Smart软件进行氨基酸的序列分析,推导出的Chi7蛋白质一级结构功能域包含有:7-26信号肽区、ChiA几丁质酶催化区、485-557类纤连蛋白Ⅲ型区、579-672几丁质结合区4个结构功能域;经跨膜区分析在线软件TMHMM2.0分析,表明Chi7蛋白前端的信号肽是跨膜信号,同时SignalP分析也表明:Chi7蛋白的成熟加工剪切位点在第32-33的Ala-Asp间.用在线蛋白质分析软件ExPASy Proteomics tools进行chi7蛋白结构分析,结果表明:在氨基酸残基200-300间有可能存在coiled coil区域,整个蛋白质中没有亮氨酸拉链结构;在蛋白的二级结构中有19.56％的螺旋结构、25.78％的折叠结构、54.67％的成环结构;整个蛋白质的三维结构呈紧密的球状.构建pBluescript SK原核表达载体在E.coli中检测到Bt几丁质酶活性,但是表达的Bt几丁质酶活性不高.将Bt chi7基因连接到枯草芽孢杆菌(Bs)表达载体pUS186,电激转化到Bs菌株QB1098中筛选重组质粒pUS-chi7.将重组质粒pUS-chi7电激转化到Bs受体菌株BS-2中,用PCR检测重组质粒pUS-chi7是否导入,最后筛选得到5株含有Bt几丁质酶基因BS-2工程菌.