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在影响山羊生产力的噬血性胃肠道线虫中,捻转血矛线虫占主要地位,它在中国、孟加拉国等湿润、热带、亚热带地区造成了重大经济损失。就控制方法来说,除了使用驱虫药外,选育具有相关抗性的山羊品种,并鉴定其与胃肠道线虫感染免疫应答有关的抗性基因和单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNPs),可能是防治捻转血矛线虫感染的一种更有效的方法。本研究调查了孟加拉山羊品种的胃肠道寄生虫感染率,并在自然放牧条件下,评估了中国和孟加拉国不同山羊品种以及群体对捻转血矛线虫的抗性和易感性,并利用SNPs鉴定了与粪球虫卵计数(FEC)性状相关的遗传抗性候选基因。1.连续三年时间对总计897只孟加拉黑山羊进行了检测,以调查孟加拉山羊胃肠道寄生虫的感染率,尤其是捻转血矛线虫的感染率。在胃肠道寄生虫感染研究中,发现艾美球虫(Eimeria oocyst)卵囊的患病率(55.2%)和它的FEC指标(1678.53±154.62epg)都是最高;并且发现蒙尼绦虫(Moniezia spp)的患病率最低(7.6%)。FEC指标分别在性别(P<0.01)、群体和年份(季节)(P<0.001)因素上呈现显著差异。在对胃肠道线虫感染研究中,发现捻转血矛线虫的患病率最高(47.1%),并且其FEC(355.09±18.54)指标也是最高的。不同山羊群体之间存在显著性差异(P<0.05),孟加拉丘陵低地黑山羊(Black Bengal High Low land goat,BBHL)的患病率(76.1%)及FEC指标(2354.55±119.26epg)均是最高,而孟加拉高丘黑山羊(Black Bengal High Hilly,BBHH)的患病率较低(33.3%),其FEC指标(220.00±12.31EPG)也比其他山羊种群低,这表明BBHH山羊种群对捻转血矛线虫的易感性较低。2.根据FEC指标对中国和孟加拉国的6个不同品种及种群共430只山羊的捻转血矛线虫易感性进行了比较。结果表明,中国山羊和孟加拉国山羊的捻转血矛线虫FEC指标平均值分别为402.86+46.60epg和158.00+31.30epg,捻转血矛线虫感染率分别为68.21%和58.00%。其中,恩施黑山羊(Enshi Black,ESB)的捻转血矛线虫感染率最高(88.89%),中国杂交山羊(Chinese cross breed,CCB)的粪便中寄生虫卵数量最高(527.74+78.13 epg)。在本研究的所有山羊品种及群体中,我们发现孟加拉西部黑山羊(Black Bengal West,BBW)的寄生虫感染率最低,孟加拉丘陵黑山羊(Black Bengal Hilly,BBH)的寄生量(112.16+17.37epg)最低。可以看出,中国和孟加拉国山羊群体间的FEC(P<0.01)指标存在显著差异。在自然放牧条件下,从FEC指标来看,孟加拉国丘陵地区的黑山羊在孟加拉国山羊群体中捻转血矛线虫易感性更低3.根据FEC指标和来自84个不同基因的129个SNPs,对中国和孟加拉国的507只山羊进行了关联分析,从6个与FEC指标显著相关(p<0.05)的遗传抗性基因CIITA、ATP2A3、HSPA8、STAT5B、ESYT1和SERPING1中鉴定出10个SNPs。其中,有两个错义突变位于山羊CIITA基因的外显子区域。STAT5B_197_A>G的多态性信息含量(PIC)、有效等位基因数(Ne)和杂合度(He)均为最高,宜昌白羊(Yichang white Goat,YWG)这三项指标最高(分别为0.50、2.00和0.38),其次是中国杂交山羊(CCB)、孟加拉黑山羊(Black Bengal,BBG)、恩施黑羊(ESB)和南京黄羊(Nanjing yellow,NJY),在所有山羊品种中,CIITA的HE、NE和PIC最低。连锁不平衡(D’,r~2)配对系数显示,CIITA和SERPING1的显著SNPs之间存在完全的连锁不平衡(r~2=1),HSPA8和ATP2A3的SNPs之间存在强连锁不平衡(r~2=0.93和0.98).在所有山羊品种中,红细胞压积(pack cell volume,PCV)与FEC指标均呈显著相关且相关系数均为负(r=-0.47;P<0.001),PCV与体重(body weight,BW)的相关性均不显著,BW与FEC指标均呈显著相关且相关系数均为正(r=0.56,P<0.001)。关联分析显示ATP2A3、HSPA8和SERPING1内的单倍型与FEC指标显著相关。4.在先天免疫调控因子NLRC3家族基因等12个候选基因中共鉴定了46个SNPs,其中4个基因(NLRC3、NLRC5、HIP1和LRP8)中的11个SNPs与FEC显著相关(p<0.05)。在NLRC5和HIP1的编码区发现三个错义突变。除了中国的南京黄羊和恩施黑羊外,所有山羊品种的HIP1_1077_A>G基因座的多态性信息含量(PIC)、基因杂合度(He)和有效等位基因数(Ne)等遗传参数均最大。连锁不平衡配对系数(d’,r2)表明,在LRP8中显著的SNP(r2=1到0.87)与NLRC3、NLRC5和HIP1之间的SNP存在强连锁不平衡(r2=0.96到0.99)。相关分析显示,NLRC3、NLRC5和HIP1中的单倍型与FEC指标显著相关(P<0.001)。5.根据宜昌白山羊(YWGs)的FEC指标高低反应性来评估山羊个体对胃肠道线虫感染的抵抗力和易感性。测定所选动物的FEC指标以及其血液循环参数如血红蛋白水平(Hg)、PCV指标并为人工感染实验做准备。山羊抗性组的FEC指标的平均值为103.38±1.20 epg,而山羊易感组的FEC指标的平均值为1180.25±43.53 epg,说明抗性组和易感组之间存在显著差异。在试验期间,抗性组和易感组的血红蛋白水平(Hg)和PCV等血液循环参数的平均值有显著差异(p<0.01),并且持续下降,其中易感组的FEC指标高于抗性组。用实时定量PCR技术(q RT-PCR)检测了YWG山羊抗捻转血矛线虫感染的ATP2A3、SERPING1、CIITA、HSPA8、ESYT1、STAT5B、NLRC3、NLRC5、HIP1和LRP8候选基因的m RNA相对表达。QRT-PCR结果显示,抗性山羊的ATP2A3(p<0.00001)、HSP8A、ESYT1和SERPING1(p<0.001)、HIP1和LRP8(p<0.0001)的m RNA表达水平高于易感山羊,但NLRC5(p<0.0001)除外,其m RNA表达水平易感山羊明显高于抗性山羊。