神经生长因子(nerve growth factor，NGF)是神经系统最重要的生物活性分子之一，兼有神经营养因子与促进神经突起生长双重作用，对神经细胞的生长、发育、分化发挥调节作用，是参与损伤神经再生和功能修复的重要因子。同时，它还参与调节免疫和造血等非神经系统的功能。 NGF在人体组织中含量极微，已有报导从胎盘中纯化hNGF，但其组织来源有限，成本高产量低，不能满足对hNGF的需求。利用基因工程方法获得有生物学活性的hNGF制品，对其基础理论研究和临床应用具有重要的意义。Bac-to-Bac系统是一种新颖的杆状病毒表达载体系统，构建及筛选重组病毒比传统的杆状病毒表达系统更为高效简单快捷，业已成为研究真核基因表达较为理想的工具。 本实验以带有hNGF全长肽基因的重组质粒pFastBac-preproNGF为模板，扩增出成熟肽β-NGF基因片段。PCR产物经双酶切后与经同样双酶切的转移载体pFactBacl相连接，转化DH5α细胞，构建重组转移载体pFastBac-pNGF并进行测序。测序结果正确后，提取该重组质粒转化进入含有穿梭载体Bacmid的受体菌DH10Bac后发生转座，得到含有hNGF成熟肽DNA的重组穿梭载体rBacmid-βNGF。再将这一重组穿梭载体转染贴壁培养的昆虫细胞Sf9，得到重组病毒rAcV-Bac-βNGF。经鉴定正确后进行昆虫细胞Sf9的感染。分别将Sf9感染后培养上清和细胞总蛋白进行SDS-PAGE电泳分析，结果显示感染细胞总蛋白在14.6kDa，左右有一表达带而其培养上清及正常培养的细胞均无相应条带。该分子量大小同预期NGF成熟肽蛋白相符，证明表达产物为非分泌型表达，约占到细胞总蛋白的5.69％。并且表达产物经western-blot检测和PC12细胞法检测具有神经生长因子的免疫学及生物学活性。