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目的:研究大鼠肾移植术后循环内皮微粒(EMP)的数量和表型与急性排斥反应病理的关系,并通过体外研究观察其对单核细胞功能的影响,阐明EMP参与急性排斥反应的部分机制。方法:1.建立大鼠肾移植模型:参考国内外经典的大鼠肾移植模型方法的基础上分别对动、静脉吻合术式进行适当改进,成功建立了大鼠原位肾移植模型。2.实验动物分组及标本采集:(1)同基因移植组(syn-,9例):供、受者均为雄性SD大鼠;(2)异基因移植组(allo-,9例):供者为Wistar大鼠,受者为SD大鼠。实验大鼠于造模后第5天经腹主动脉取血5ml(抗凝),高速离心分离得到EMP;同时摘取移植肾脏,10%中性甲醛固定。3.移植肾脏病理学检测:固定的移植肾脏标本石蜡切片,HE染色。采用Banff 97标准对移植肾脏排斥反应的病理学改变程度进行分级评分;4.移植受体血浆EMP数量和表型分析:分离得到的EMP采用流式细胞术分析EMP的数量和表型,采用Spearman秩相关分析EMP数量及表型和移植术后排斥反应程度的相关性。5.体外EMP的产生与鉴定:TNF-α刺激培养的人脐静脉内皮细胞株EAhy926产生EMP,用流式细胞术分析其数量和表型。6. EMP对人单核细胞株THP-1细胞产生细胞因子的影响:按EMP与THP-1细胞的数量的比例分别分为:1:10组、1:50组、1:100组、1:150组;另设10μg/ml LPS作为阳性对照组,PBS组作为阴性对照组,用TNF-α刺激THP-1细胞48小时后离心分离EMP时得到的培养上清作为刺激物为上清对照组。ELISA方法测定不同浓度的EMP刺激THP-1细胞分泌TNF-α、IL-6的水平。7.运用RT-PCR方法测定不同浓度的EMP对THP-1细胞表达MCP-1mRNA、HLA-DR mRNA水平的影响,探讨EMP参与免疫应答的部分机制。结果:1.成功建立大鼠原位肾移植模型,供肾动静脉吻合时间45±5min,手术时间150±10min,术后大鼠状态好,无并发症。2.异基因组移植肾脏表现为典型急性排斥反应病理学改变:同基因移植组和异基因移植组移植肾脏Banff病理学评分分别为(0.78±1.09)和(5.22±0.83),有显著性差异(P<0.01)。3.受体血浆EMP数量和表型变化以及与移植肾脏排斥反应病理的相关性:异基因移植组Annexin V+MP、CD144+ EMP和CD144+ /CD62E+EMP数量均明显高于同基因移植组(P<0.05),且分别与排斥反应的严重程度呈正相关关系(rs=0.84,P<0.01;rs=0.81,P<0.01;rs=0.65,P<0.05)。4.体外EMP的产生和鉴定:EAhy926细胞经TNF-α刺激48小时后,流式分析EMP结果为CD144+EMP占88.82%,CD144+/CD62E+EMP占29.97%。表明刺激和分离EMP条件可行。5. EMP对THP-1细胞分泌IL-6、TNF-α水平的影响:用单因素方差分析,显示1:50组、1:100组、1:150组和上清组THP-1细胞表达的IL-6和TNF-α水平明显升高(与PBS组比较P<0.05),但不及LPS组明显(P<0.05)。6. EMP对THP-1细胞MCP-1mRNA和HLA-DR mRNA表达水平的影响:与PBS组比较,1:50组、1:100组、1:150组和上清组MCP-1mRNA、HLA-DR mRNA表达水平显著升高(P<0.05)。与LPS组比较,1:10组MCP-1 mRNA、HLA-DR mRNA表达水平明显降低(P<0.05)。结论:实验结果表明发生急性排斥反应组大鼠血浆中CD144+ EMP和CD144+ /CD62E+EMP数量明显升高,且与急性排斥反应病理程度有相关关系。提示EMP水平可以作为急性排斥反应的检测指标。EMP参与急性排斥反应的机制可能是EMP作为外来抗原能诱导单核细胞活化,促使其提呈抗原的能力增强并分泌多种细胞因子参与免疫杀伤效应。