目的:本实验旨在探讨体外不同条件下构建组织工程化骨的方法,对其在兔骨缺损修复中的效果进行评价,并对NO及eNOS的作用机制进行了研究。方法:体外即刻构建或经RCCS快速构建组织工程化骨修复兔骨缺损,观察骨组织修复重建的效果;检测不同条件下eNOS mRNA表达水平和NO生成含量及其对兔下颌骨标准性骨缺损修复的影响;检测eNOS基因修饰组织工程化骨裸鼠体内异位成骨能力。结果:兔骨缺损修复实验显示,细胞-支架复合体即刻种植新骨形成较差,联合应用引导组织再生膜可提高新骨形成面积百分比。RCCS培养的组织工程化骨,其颅骨修复效果优于静态培养,且24h培养和72h培养无显著性差异。RCCS增加细胞eNOS mRNA水平,培养液中NO含量增加。给予L-argine增加NO生成,兔下颌骨缺损区成骨量明显高于L-NAME组。真核表达载体pEGFP-N3-eNOS转染MSCs植入裸鼠皮下,毛细血管生长和新骨形成活跃。结论:细胞-支架复合体即刻回植体内时联合应用引导组织再生膜可有效防止细胞流失,促进成骨。RCCS是体外快速构建组织工程化骨的有效方法,只需培养24h便可获得良好的骨修复能力。RCCS可上调eNOS mRNA水平,增加NO产量。增加的NO能有效提高骨缺损修复效果。eNOS基因修饰的组织工程化骨有助于加速骨缺损的修复。