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卵泡抑素（follistatin,FST）得名的原因是因为其对促卵泡素有很强的抑制作用,是一种单链糖蛋白,最初,对卵泡抑素的研究多集中在生殖系统中。近年来的研究表明,FST能与TGF-β超家族的多个成员相互作用,在细胞增殖、脂肪细胞和神经细胞分化、调节能量代谢等生殖系统以外的多个生物过程中发挥重要的调控作用。本课题组在利用基因芯片筛选民猪抗寒基因时,发现FST与民猪冷应激存在着相关性。本实验以FST基因为研究对象,对民猪FST基因及其侧翼序列进行克隆、测序,分析FST基因的核心启动子区及其甲基化情况,并在构建FST基因稳定过表达和干扰的猪成纤维细胞系的基础上,对其在冷诱导引起的细胞凋亡中发挥的作用进行了探索,通过数字基因表达谱（Digital gene expression,DGE）方法检测其发挥作用的通路,得到的结果如下:（1）成功以基因组为模板克隆测序方法得到民猪5’侧翼序列（1800 bp）,与NCBI序列（GenBank No.NC010458.3）相比相似度为99%,肝脏组织c DNA为模板克隆了民猪FST基因全长CDS序列（1035 bp）,与NCBI序列（GenBank No.NC010458.3）相比有5个碱基差异,并造成3个错义突变,巢式PCR克隆了民猪FST基因部分3’UTR序列,PITA预测发现一个hsa-miR-320c的结合位点。（2）采用双荧光素酶报告基因检测系统,在瞬时转染的PK15细胞内鉴定了猪FST基因的启动子活性区,发现位于ATG上游-298bp-291bp处的MZF1转录因子结合区域是影响FST基因启动子活性的关键区域,该元件缺失会显著影响FST基因的启动子活性,而过表达MZF1转录因子可以显著促进FST基因的表达。（3）对不同生活纬度（温度）的四个地方猪种耳组织样中FST基因启动子核心区的甲基化情况进行了检测,发现在四个地方猪种中FST基因的CpG岛均处于极低程度的甲基化状态,相互之间无差异。对成纤维细胞冷诱导过程中该区域的甲基化情况进行了检测,发现冷诱导过程没有改变该区域的甲基化情况,同样处于极低程度的甲基化状态。（4）流式细胞仪检测了4℃处理2h、5h、16h、20h、24h和40h的猪胎儿成纤维细胞凋亡的变化并统计分析,发现在最初的2h内细胞没有呈现明显的凋亡,是凋亡过程的诱导期,2h-5h细胞出现了显著的凋亡,并且凋亡程度与冷诱导时间成正比,40h时,细胞几乎全部裂解死亡。（5）Real-time PCR和Western blot检测4℃冷诱导过程中FST基因的表达,发现此过程中FST基因的表达量不断上调,推测FST基因在抵抗细胞冷诱导产生的细胞凋亡过程中发挥重要作用。Real-time PCR检测了细胞凋亡密切相关的Bcl-2、Bcl-2l1和Bax基因的变化,发现各基因表达出现下调趋势,Bcl-2基因在4℃处理24h后出现极显著下调。（6）原代培养猪胎儿成纤维细胞,构建FST基因的pc DNA3.1（+）-FST真核表达载体和pSilencer-FR1的RNA干扰载体,转染并G418筛选,成功建立了FST基因稳定干扰和稳定过表达的猪胎儿成纤维细胞系。（7）MTT法检测FST基因对细胞增殖的影响,发现FST基因过表达能显著促进成纤维细胞的增殖,FST基因干扰后,与正常细胞相比增殖缓慢,但与阴性对照组相比,差异不显著。（8）4℃冷诱导5h,FST基因过表达组细胞凋亡程度较弱,而FST基因干扰组细胞出现局部变大、空泡等凋亡现象。Real-time PCR检测了FST基因对4℃冷诱导过程中Bcl-2、Bcl-2l1和Bax基因表达的影响,发现与对应时间点空白组和阴性对照组细胞相比,FST基因过表达能促进Bcl-2和Bcl-2l1基因表达上调和Bax基因表达下调,并且与FST基因干扰组细胞相比,FST基因过表达能明显上调Bcl-2/Bax基因表达的比例。（9）数字基因表达谱方法检测并分析FST基因稳定过表达和干扰的细胞系中的差异表达基因,并对其进行了GO分析和pathway显著性富集。发现两实验组中与凋亡相关的通路都指向了p53信号通路。推测FST基因参与p53信号通路的调节,在细胞冷诱导产生的凋亡中发挥作用。