【摘 要】
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目的通过体内药理实验考查蒲公英多糖和黄芪多糖联用抗肝纤维化（Hepatic fibrosis,HF）药效活性及二者联用的协同作用,并基于“肠-肝轴”探究联用多糖抗HF作用机制,为开发联用多糖抗HF提供理论依据。方法（1）采用水提醇沉法提取蒲公英粗多糖和黄芪粗多糖,两种粗多糖经三氯乙酸法脱蛋白,大孔吸附树脂脱色后得纯化后的蒲公英多糖（Taraxacum mongo Licum polysacchar
【基金项目】
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黑龙江省北药与功能食品特色学科建设项目（NO.2018-TSXK-02）；
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目的通过体内药理实验考查蒲公英多糖和黄芪多糖联用抗肝纤维化（Hepatic fibrosis,HF）药效活性及二者联用的协同作用,并基于“肠-肝轴”探究联用多糖抗HF作用机制,为开发联用多糖抗HF提供理论依据。方法（1）采用水提醇沉法提取蒲公英粗多糖和黄芪粗多糖,两种粗多糖经三氯乙酸法脱蛋白,大孔吸附树脂脱色后得纯化后的蒲公英多糖（Taraxacum mongo Licum polysaccharide,TMP）和黄芪多糖（Astragalus polysaccharide,APS）;采用高效凝胶渗透色谱法（High performance gel permeation chromatography,HPGPC）和PMP柱前衍生法分别测定TMP和APS分子量和单糖组成;运用现代分析仪器检测其理化性质。（2）采用CCl4诱导HF小鼠模型,通过小鼠体重、肝指数变化和病理学观察,对TMP+APS进行药效学评价。（3）ELISA法检测小鼠血清中ALT、AST、HA、PCⅢ和ColⅣ等指标,以及小鼠肝脏组织炎症因子LPS、IL-6和TNF-α和回肠组织s Ig A含量;Western blot和RT-PCR技术检测小鼠肝脏中TLR4、My D88、NF-κB p65蛋白和m RNA表达;高效液相色谱法（High performance liquid chromatography,HPLC）测定小鼠粪便中短链脂肪酸（Short chain fatty acids,SCFAs）含量;16S r DNA扩增子测序技术检测小鼠肠道菌群结构变化。结果（1）蒲公英粗多糖与黄芪粗多糖提取率分别为8.32±0.07%、4.96±0.12%;TMP和APS总糖含量分别为69.72±0.45%和79.01±0.81%。TMP分子量分布在2.30×10~6Da与3.26×10~3Da之间,集中分布在两个组分,分子量分别为4.85×10~5Da和7.08×10~4Da,由Man、Rha、Gal A、Gal、Xyl、Fuc组成,摩尔比为1.25:1.75:2.83:8.33:4.83:1;APS分布于两个组分,分子量分别为8.18×10~6Da和2.21×10~4Da,由Man、Rib、Rha、Glc A、Gal A、Glc、Gal、Xyl、Ara组成,摩尔比为1:1.36:1.43:2.93:2.64:2.08:4.21:3.36:7.14;FI-IR法测定结果表明TMP和ASP均具有多糖特征吸收峰;SEM法观察多糖表观特征,发现TMP和APS形貌各不相同;XRD法测定结果显示TMP和APS无明显尖峰,表明这两种多糖结晶度较低。（2）小鼠体重及肝指数结果表明,TMP+APS可以缓解CCl4诱导的HF小鼠体重减轻,显著降低肝指数（P＜0.05）;病理学观察结果显示:TMP+APS能够减轻HF小鼠肝脏及回肠组织细胞损伤,降低HF小鼠胶原纤维沉积程度,显著降低纤维化比例（P＜0.05）,且效果均优于TMP和APS组。（3）与Mod组相比,TMP+APS组小鼠血清中ALT、AST、PCⅢ、Co IⅣ和HA含量显著降低（p＜0.05）,肝脏组织中炎症因子LPS、IL-6和TNF-α含量显著降低（p＜0.05）;回肠组织s Ig A含量显著升高（p＜0.05）;TLR4、My D88、NF-κB p65蛋白表达和m RNA表达显著降低（p＜0.05）;TMP+APS组SCFAs表达增多;16S r DNA分析结果显示,TMP+APS组小鼠肠道菌群丰富度及多样性增加,可调节肠道菌群,降低丰度值厚壁菌门（Firmicutes）,升高拟杆菌门（Bacteroidetes）相对丰度。结论确定了TMP和APS的分子量范围、单糖组成摩尔比等参数和红外光谱特征峰、形貌表观特征。TMP与APS联用能够协同发挥抗HF作用。TMP+APS抗HF作用机制可能是经“肠-肝轴”的免疫系统与TLR4/My D88/NF-κB信号传导通路而实现的,通过调节肠道菌群组成结构,影响各菌门丰富度,促进SCFAs表达,减少LPS含量,下调TLR4/My D88/NF-κB信号通路,降低炎症因子水平,恢复肠粘膜屏障,从而改善肝纤维的作用。
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