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第一部分CyclinD1和PTEN在胃黏膜癌变多阶段中的表达及相关性目的:采用免疫组化法探讨癌基因细胞周期蛋白D1(Hormone of cell cycle D1, CyclinD1)和抑癌基因张力蛋白同源染色体缺失磷酸酯酶(Phosphate and tensin homology deleted on chromosome ten, PTEN)在胃黏膜癌变多阶段中的表达及相关性,为进一步研究胃癌的发生机制提供理论基础,为胃癌的早期诊断提供实验室依据,也为中西医的结合找到切合点。方法:选择河北医科大学中医院临床病理科保存的2004年-2008年胃窦部病理活检组织存档蜡块,共223例。其中胃癌组织标本均未经放射治疗和(或)化学治疗。应用免疫组织化学染色法检测CyclinD1和PTEN在不同胃黏膜病变石蜡包埋标本的表达及相关性。结果:1.在慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生、不典型增生和胃癌中CyclinD1的表达率逐渐增高,PTEN的表达率逐渐降低,均有统计学意义(P<0.05)。2.CyclinD1和PTEN在胃黏膜癌变多阶段中的阳性表达率呈负相关。结论:1.随着胃黏膜癌变的阶段性进展,CyclinD1蛋白表达的阳性率越来越大;PTEN蛋白表达的阳性率越来越小。2.随着胃黏膜癌变的阶段性进展,CyclinD1蛋白和PTEN蛋白表达有关联性,密切程度中等,随着CyclinD1蛋白表达增加PTEN蛋白表达减小。第二部分化浊解毒和胃方对慢性萎缩性胃炎胃癌前病变的疗效观察目的:观察以“浊毒”理论组方的化浊解毒和胃方对慢性萎缩性胃炎(CAG)癌前病变的治疗作用。方法:将110例CAG癌前病变患者随机分为两组,治疗组(55例)给予化浊解毒和胃方口服,对照组(55例)给予维甲酸口服,疗程均为6个月。观察两组患者临床内镜、病理疗效及治疗前后CyclinD1和PTEN表达积分值的变化。结果:胃镜下治疗组对黏膜白相和胆汁反流的改善优于对照组,病理疗效变化比较显示,治疗组较对照组治愈率高,免疫组化结果显示,化浊解毒和胃方能显著抑制CyclinD1的表达,升高PTEN的表达,有显著性差异,具有统计学意义(P<0.05)。结论:1.化浊解毒和胃方能减轻患者胃黏膜充血、水肿、糜烂,缓解黏膜白相、颗粒增生、胆汁反流等胃镜征象。2.化浊解毒和胃方能提高患者IM、ATP等不同病理分型的治愈率。3.化浊解毒和胃方能抑制各阶段胃黏膜CyclinD1蛋白的表达、增强PTEN蛋白的表达,抑制细胞增殖、促进细胞凋亡,从而恢复细胞增殖与凋亡间的平衡状态。第三部分化浊解毒和胃方对胃癌前病变大鼠胃癌相关基因的影响目的:观察化浊解毒和胃方对慢性萎缩性胃炎癌前病变大鼠胃黏膜细胞周期蛋白D1及张力蛋白同源染色体缺失磷酸酯酶基因mRNA表达的影响。方法:Wistar大鼠66只随机分为6组,每组11只:正常对照组(空白组)、模型组、维甲酸治疗组(维甲酸组)、化浊解毒和胃方高剂量治疗组(高剂量组)、化浊解毒和胃方中剂量治疗组(中剂量组)、化浊解毒和胃方低剂量治疗组(低剂量组)。采用幽门弹簧插入复合法复制CAG癌前病变模型,造模成功后,各组给予相应的药物每天灌胃1次,每次2mL,连续12周然后用基因的反转录(RT)和聚合酶链式扩增(PCR)相结合(RT-PCR)检测癌前病变大鼠胃黏膜CyclinD1及PTENmRNA表达。结果:与空白组比较,模型组CyclinD1mRNA的表达增高,PTENmRNA表达降低,差异有统计学意义(P<0.05);各治疗组与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05);高剂量组与维甲酸组降低CyclinD1mRNA,增高PTENmRNA的表达优于中药中、低剂量组(P<0.05)。结论:1.化浊解毒和胃方能使实验性慢性萎缩性胃炎大鼠的饮食、活动、精神状态、毛发、摄食、大便以及体重等方面得到大体改善。2.化浊解毒和胃方能改善实验性慢性萎缩性胃炎大鼠的病理改变。3.化浊解毒和胃方能降低CyclinD1mRNA的表达,明显增高PTENmRNA表达。4.“以方测证”验证慢性萎缩性胃炎癌前病变中CyclinD1mRNA、PTENmRNA可能是“浊毒”在基因方面的物质表达。第四部分化浊解毒和胃方对胃癌前病变大鼠血管生成机制的影响目的:本研究以方测证,观察化浊解毒和胃方对慢性萎缩性胃炎胃癌前病变大鼠胃黏膜组织缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的影响,探讨化浊解毒对慢性萎缩性胃炎癌前病变血管新生方面的可能治疗机制。方法:Wistar大鼠66只随机分为6组,每组11只:正常对照组(空白组)、模型组、维甲酸治疗组(维甲酸组)、化浊解毒和胃方高剂量治疗组(高剂量组)、化浊解毒和胃方中剂量治疗组(中剂量组)、化浊解毒和胃方低剂量治疗组(低剂量组)。采用幽门弹簧插入复合法复制CAG癌前病变模型,各组给予相应的药物每天灌胃1次,每次2mL,连续12周。然后采用免疫组织化学和western-blot的方法,观察化浊解毒和胃方对慢性萎缩性胃炎胃癌前病变大鼠胃黏膜组织VEGF、HIF-1α的影响结果:与空白组比较,模型组及各治疗组VEGF、HIF-1α的表达增高,差异有统计学意义(P<0.05);各治疗组与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05);高剂量组与中剂量组降低VEGF、HIF-1α的表达优于维甲酸组、低剂量组(P<0.05),低剂量组与维甲酸组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1.化浊解毒和胃方能降低胃癌前病变大鼠胃黏膜HIF-1α、VEGF的表达。2.“以方测证”验证慢性萎缩性胃炎癌前病变中HIF-1α、VEGF可能是“浊毒”在血管新生机制方面的物质表达。3.化浊解毒和胃方可能是通过抗血管生成机制从而达到防治萎缩性胃炎胃癌前病变的治疗效果,并且存在一定的量效关系。