新生血管性青光眼患者血清及房水中VEGF、EPO的表达研究

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新生血管性青光眼(nonvascular glaucoma,NVG)是由于虹膜表面及前房角新生血管长入,使得小梁网和周边的虹膜组织互相粘连,引起眼球内眼压升高而出现的一种常见的继发性青光眼。其 VG的形成的病理过程是眼部在缺血缺氧或炎症的反复刺激下,纤维结缔组织在前房及虹膜内生长同时伴有新生血管的形成,病变的进一步发展会使得小梁网发生粘连,阻塞了房水的流出通道,导致眼压的升高。视网膜的缺血缺氧在高眼压的状态下继续加重,刺激新生血管形成,使得视神经和视功能受到影响,加重视力损害,对患者的生活质量受到较大的影响。该病常继发于视网膜静脉阻塞(retinal vein occlusion,RVO)、糖尿病性视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)及视网膜缺血综合征等疾病,同时一般的抗青光眼药物及手术治疗效果差,也被称为难治性青光眼的一种。目前有研究表明缺血和缺氧共同作用可导致虹膜及房角新生血管的产生。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是一种血管通透性诱导因子和有效的血管形成因子,除了具有促进内皮细胞增殖的功能外,还有着内皮细胞的特异性有丝分裂原的功能。促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)主要来源于胎儿的肝脏及成人的肾脏,是一种含唾液酸的酸性热稳定(80℃)糖蛋白,是生成正常红细胞所必须的激素。当组织受到外界不良刺激后 EPO作为一种组织保护性因子,一改平时的静息状态会迅速表达,周围组织中的血管内皮细胞在其自分泌或旁分泌的方式刺激下生长,促进新生血管的形成。近些年来,国内、外对糖尿病视网膜病变中房水、玻璃体VEGF等相关因子的研究较多,而对NVG患者血液、房水中EPO水平的研究甚少。NVG所致的视盘血流灌注不足及组织缺血是否促使了EPO的释放?VEGF是一种重要的血管生长因子,在正常视网膜血管系统的发育中发挥作用,而在视网膜缺血性病变及某些非缺血性病变引起的新生血管性青光眼中可能同样发挥重要的作用。  目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)及促红细胞生成素(EPO)的表达水平与新生血管性青光眼的内在联系。  方法:采用双抗体夹心酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA法)检测NVG患者血清及房水中的VEGF和EPO的含量。对NVG患者血清及房水中的VEGF、EPO细胞因子的水平进行检测分析,观察两者与 N VG的关系。采用RT-PCR检测技术对三组患者血清中VEGFmRNA和EPOmRNA的表达进行检测,进一步了解VEGF、EPO在NVG中的表达情况,为其早期诊断、治疗(包括基因治疗)防治提供一定的实验依据。研究对象分为A、B、C三个组,每组患者20例。A组实验组20例为新生血管性青光眼组,B组实验组20例为原发性青光眼组,C组对照组20例为年龄相关性白内障组(Age-rlateed cataract)。分别对所有的研究对象进行血清及房水样本的采集。血清样本在手术当天抽取静脉血3-4ml后进行离心取0.3-0.4 ml;房水样本在手术中进行采集100-200μl。采用ELISA法分别测定血清与房水中VEGF、EPO血管因子的含量。采用RT-PCR检测技术对三组患者血清中VEGFmRNA和EPO mRN A的相对表达进行检测。实验数据的管理和分析采用SPSS14.0统计软件进行,用均数±标准差(x±s)对数据统计描述,应用单因素方差分析(ANOVA)对不同组间的VEGF及EPO表达进行比较;同组内同一因子在不同标本间的水平较用配对样本t检验;应用Pearson相关分析对同一组患者血清及房水样本的VEGF及EPO表达进行比较检测其相关性。  结果:⑴血清中VEGF的浓度水平:A组506.28±40.75 p g/ml、B组342.73±21.75 pg/ml和C组176.05±16.43pg/ml,三组两两比较,差异均具有统计学意义(F=680.667,P<0.001)。⑵血清中EPO的浓度水平:A组23.91±2.29 IU/L、B组23.38±2.24 IU/L和C组24.42±3.42 IU/L,三组间差异无统计学意义(F=0.773,P>0.05)。⑶房水中VEGF的浓度水平:A组1120.49±162.94pg/ml、B组360.55±20.68pg/ml和C组175.01±17.06pg/ml,三组两两比较,差异均有统计学意义(F=552.247,P<0.001)。⑷房水中EPO的浓度水平:A组171.28±13.68U/L、B组45.14±4.56 IU/L和C组25.33±2.45 IU/L,三组两两比较,差异均有统计学意义(F=1757.436,P<0.001)。⑸在A组,房水VEGF水平1120.49±162.94 pg/ml明显高于血清中506.28±40.75 pg/ml的水平,差异有统计学意义(t=15.336,P<0.001)。在B组中,房水VEGF水平360.55±20.68pg/ml高于血清中342.73±21.75 p g/ml的水平,差异有统计学意义(t=2.568,P<0.05)。在C组中,血清与房水之间的浓度无统计学意义(t=0.277,P>0.05)。⑹在A组中,房水EPO水平171.28±13.68 IU/L明显高于血清中23.91±2.29IU/L的水平,差异有统计学意义(t=44.65,P<0.001)。在B组中,房水 EPO水平(45.14±4.56 IU/L)高于血清中(23.38±2.24 IU/L)的水平,差异有统计学意义(t=18.95,P<0.001)。在C组中,房水与血清中的浓度无明显差异,无统计学意义(t=1.558,P>0.05)。⑺VEGF和EPO浓度在新生血管性青光眼房水中无明显相关性(r=-0.182,P>0.05)。⑻血清中VEGFmRNA相对表达量:三组两两比较,差异均具有统计学意义(P<0.001)。⑼血清中EPOmRNA相对表达量:三组间差异无统计学意义(F=0.093,P>0.05)。  结论:①VEGF和EPO局部浓度的升高与新生血管性青光眼患者虹膜新生血管有关。②VEGF、EPO眼内局部浓度的升高与高眼压及缺氧有关。③VEGF、EPO在新生血管性青光眼的发病机制中可能是相互独立的因素。
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