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[目的]单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,以下简称Lm)为重要的革兰氏阳性食源性病原菌,是兼性细胞内寄生菌,在自然界中广泛存在。Lm能够抵御高温或低温,高盐浓度,氧化胁迫或者营养物质匮乏的恶劣环境,Lm必须随之调整自身的代谢方可存活。作为一种兼性胞内寄生菌,Lm为适应宿主细胞内部环境和能源需求,优先选用甘油或6-磷酸葡萄糖作为代谢碳源。而当Lm以甘油作为唯一碳源时,发现Lm中PrfA调控的毒力基因表达水平显著上升,也即PrfA活性增强。PrfA因子是迄今在Lm中发现的具有调节绝大多数毒力基因转录表达的调控因子,它对于Lm有效侵染宿主细胞起到至关重要的作用。而SigB因子是调节环境胁迫应答反应重要基因表达的因子,保证了Lm的抗逆生长能力。为探究Lm中甘油代谢的调控机制,本实验对PrfA和SigB因子在Lm甘油代谢中的作用进行了初步探讨。[方法]1)探究PrfA和SigB因子在Lm甘油代谢过程中所起的作用,本实验利用高通量蛋白质组学方法,比较研究了Lm野生型菌株EGDe、PrfA和SigB的单缺失(EGDeΔprfA和EGDe AsigB)及双缺失(EGDeΔprfAΔsigB)四种菌在基础培养基(MM)中分别以葡萄糖(PTS糖)和甘油(非PTS糖)为唯一碳源时蛋白质的表达差异。2)对蛋白组学结果进行RT-PCR的验证和分析,采用反转录PCR(RT-PCR)方法,检测EGDe, EGDeΔprfA, EGDeΔprfApPrfA(prfA缺失型菌株中携带表达野生型PrfA蛋白的重组质粒)以及EGDeΔprApPrfA*(EGDeΔprfA中携带组成性表达高活性PrfA*蛋白的重组质粒)在基础培养基(MM)中分别以葡萄糖(PTS糖)和甘油(非PTS糖)为唯一碳源时目的基因的表达量差异。[结果]1)通过比较并分析EGDe与ΔprfA在基础培养基中以甘油为唯一碳源生长至对数期时总蛋白表达图谱的差异,可知以甘油为唯一碳源时,Lm中受PrfA因子调控的蛋白21个,其中Lmo1154, Lmo1155, Lmo1165, Lmo1293既受到PrfA因子调控,且其编码的蛋白质的功能与甘油的代谢密切相关,分别催化甘油的脱氢,丙二醇的脱氢和丙醛向丙酮酸的转变过程；通过比较和分析EGDe与ΔsigB在基础培养基中以甘油为唯一碳源生长至对数期时总蛋白表达图谱的差异,发现以甘油为唯一碳源时,Lm中受SigB因子调控的蛋白8个,它们分别是与蛋白质和核苷酸合成相关的酶类,功能上与甘油的代谢无直接相关性；2) RT-PCR结果表明在甘油处理组(基础培养基中仅添加甘油作为唯一碳源)中的Lm甘油激酶和3-磷酸甘油脱氢酶表达量显著或极显著高于葡萄糖处理组(基础培养基中仅添加葡萄糖作为唯一碳源)；即表明Lm的甘油代谢过程中这两种酶类反应活跃；适当浓度的PrfA促进Lm进行甘油代谢；而高浓度的PrfA或PrfA*阻碍Lm中的甘油代谢。[结论]PrfA因子及其活性高低对于Lm的甘油代谢具有重要作用,而SigB因子对Lm甘油代谢并无直接调控作用