大肠癌(colorectal cancer,CRC)是严重威胁人类健康的主要肿瘤之一,其发病率呈逐年上升趋势。随着分子生物学研究的不断深入,肿瘤确认为一种基因病,癌基因的激活与抑癌基因的失活是其发生发展的内在本质。随着后基因组时代的到来,国内外应用具有高度并行性、高通量、微型化和自动化特色的基因芯片技术对大肠癌基因表达谱进行了较多研究,使大肠癌相关基因数据库不断丰富。然而,这些研究仅限于基因表达谱数据的初步挖掘,对筛得的大肠癌相关基因尚缺乏后续的研究报道,未形成系统性研究。 本课题是许红民等“不同分化程度大肠癌的基因表达谱分析”课题的延伸。许红民等首次应用美国Affymetrix公司制备的HG-U133原位合成寡核苷酸芯片(含迄今所知的人类全基因共计32264个,包括19308个已知的人类基因和12956个EST簇)技术,以相应正常大肠粘膜组织为对照,对不同分化程度大肠癌组织进行基因水平系列研究,筛查得到一系列大肠癌分化差异表达基因及ESTs。其中,MAGEA3为最重要的大肠癌分化差异表达基因;Affyrmetrix芯片编号为233399_x_at、Representative Public ID为AU145662的EST(本论文暂命名为CRC-EST1)为较重要的大肠癌分化差异表达ESTs之一。 本研究采用的主要实验方法和步骤: 1.应用免疫组织化学染色技术,观察MAGEA3在大肠癌组织中的表达; 2.结合临床病理资料,探讨MAGEA3表达的临床意义; 3.应用RT-PCR技术,考察CRC-ESTl在大肠癌组织和相应正常大肠粘膜、肺组织及子宫内膜中的表达; 4.应用RACE技术,钓取该EST的3’端。