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SSTR5是生长抑素受体(somatostatin receptor)家族的一种亚型。目前研究表明许多激素受体的抗体具有相应配体的生物学效应，而且SSTR5又与促进动物生长激素(GH)的分泌有关，这些资料结果为调控动物GH分泌提供了一条新的思路。本课题根据GenBank猪的SSTR5氨基酸序列，利用在线软件分析SSTR5的胞外区、跨膜区的位置，按照其跨膜结构，将其第二个胞外区肽段作为研究对象，采取大肠杆菌偏爱密码子设计基因，人工合成双链DNA，将其亚克隆至原核表达载体pET-32a(+)，构建了原核表达载体，并诱导表达和纯化了融合蛋白。用纯化的融合蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔，制备出相应的抗体并经过ELISA和Western Blot分别检测抗血清中抗体的效价和特异性。通过先盐析沉淀后透析的方法初步纯化免疫球蛋白IgG。用制备的SSTR5-ECL II抗血清来处理原代培养的猪腺垂体细胞，通过RIA方法检测腺垂体细胞培养基GH的含量。研究结果如下：
1.原核表达载体pET-32a㈩-SSTR5-ECL II的构建、表达及纯化(1)将人工合成的SSTR5-ECL II基因片段与pET-32a(+)质粒进行重组，成功构建了原核表达载体pET-32a㈩-SSTR5-ECLII，并在大肠杆菌BL21菌株中进行表达。经0.5 mM/L IPTG、30℃诱导6h后，能够高表达约25 kDa目的蛋白条带，表达量占菌体总蛋白的50％，且表达产物主要以包涵体的形式存在。
(2)利用pET-32a(+)载体的His-tag标签并采用镍离子亲和层析法和透析法对目的蛋白进行纯化和除盐，经SDS-PAGE分析，蛋白的条带单一清晰，纯度约为90％。
2.抗pET.32a(+)及pET-32a(+)-SSTR5-ECL II的多克隆抗体的制备
(1)将pET-32a(+)空载体蛋白及纯化后的融合蛋白pET-32a(+)-SSTR5-ECL II作为抗原免疫新西兰大白兔，制备出的抗血清经过饱和硫酸铵沉淀法和透析法粗提纯出免疫球蛋白，纯化后在分光光度计上测蛋白浓度，蛋白浓度为3.0mg/ml.
(2)将纯化后的抗血清，进行间接ELISA检测，得到了高滴度的抗体，其效价达到1：409600。但由于存在交叉反应，实际针对SSTR5-ECL II片段的抗体效价约有1：32000。分别以pET-32a(+)-SSTR5-ECLII重组蛋白和SSTR5-ECL II-OVA纯肽作为抗原进行Western Blot检测，可以看到明显的预期条带，表明已经制备出了效价较高，特异性强的抗SSTR5-ECL II的多克隆抗体。
3.抗SSTR5-ECL II多克隆抗体的生物学活性检测
用pET-32a(+)-SSTR5-ECL II多克隆抗体单独处理猪腺垂体细胞，结果表明该抗体有促进猪腺垂体细胞分泌GH的作用，与阴性对照相比提高幅度达24.7％且差异极显著(P<0.01)；同时使用lO-7mol/L的SS与抗体一起处理猪腺垂体细胞，SS可以降低该抗体的促进效应，降低幅度可达到23.2％且差异极显著(P<0.01)。
研究结果表明经过原核表达、蛋白纯化与浓缩、动物免疫等环节制备出的SSTR5-ECL II抗体具有结合并激活SSTR5的作用，促进细胞GH的分泌，为下一步在活体水平的研究应用打下基础。