【摘 要】
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心肌梗塞是威胁人类健康的严重疾病，也是致死率极高的突发性心血管疾病。及时对有胸痛史的病人进行心肌损伤的检测，可能为病人提供及早的诊断，从而赢得进行有针对性治疗的宝贵时
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心肌梗塞是威胁人类健康的严重疾病，也是致死率极高的突发性心血管疾病。及时对有胸痛史的病人进行心肌损伤的检测，可能为病人提供及早的诊断，从而赢得进行有针对性治疗的宝贵时间，提高病人的生存率。临床研究证明，cTnⅠ对于早期诊断急性心肌梗塞，冠状动脉综合症等心脏手术的愈后评估，是一项非常重要的生化指标。人心肌钙蛋白Ⅰ是WHO推荐的用于检测心肌损伤的特异性较高的标志物。
目标：克隆和表达出具有生物活性的人心肌钙蛋白Ⅰ，为将来开发心肌损伤的快速诊断试剂盒或是快速诊断试纸提供低成本的抗原，为大量制备单抗提供保证。方法：本文通过从人心肌cDNA文库中调取人心肌钙蛋白Ⅰ的基因，并将其克隆到pET-32a载体中，构建pET-32a-cTnⅠ重组质粒。然后将该重组质粒转化到大肠杆菌Rosetta(DE3)PlysS菌株中，经IPTG诱导表达后通过SDS-PAGE和WesternBlot对重组蛋白进行鉴定，用硫酸氨分级沉淀的方法初步对重组蛋白进行纯化。结果：从人心肌cDNA文库中获得了人心肌钙蛋白Ⅰ的编码片段。通过PCR、双酶切和DNA测序的鉴定，证实成功构建出pET-32a-cTnⅠ重组质粒。重组蛋白经过SDS-PAGE和WesternBlot的鉴定，证实重组蛋白为人心肌钙蛋白Ⅰ。在经过硫酸氨的分级沉淀后，菌体蛋白明显减少，人心肌钙蛋白Ⅰ在总蛋白中的百分比增加，为进一步的纯化奠定了基础。
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