FoxO3a在大鼠胚胎神经细胞LTP过程中的早期表达变化的研究

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目的:观察Kcl刺激诱导大鼠脑皮质神经细胞后不同时间点FoxO3a及与其表达调控相关的基因Ras、Raf、MEK、ERKl、ERK2、PI3K、Akt、P27kip及Bim表达的变化,初步探讨FoxO3a与这九个基因的相互作用对活动依赖性神经细胞生长、存活的作用及影响。方法:原代细胞培养获取胎龄17d大鼠脑皮质神经细胞;收集胎龄11d至出生1d的大鼠脑皮质组织;采用RT-PCR方法分别检测Kcl刺激诱导的大鼠脑皮质及不同发育时期大脑皮质组织中FoxO3a以及相关九个基因在转录水平的表达情况。结果:原代细胞培养显示细胞状态良好。RT-PCR显示,在Kcl刺激诱导的大鼠脑皮质神经细胞中:(1)FoxO3a、Ras、Raf、MEK、ERKl、ERK2、PI3K、Akt、P27kip及Bim mRNA在各组不同时间点神经细胞中均有表达;(2)FoxO3a mRNA在Kcl刺激诱导后30min、3h表达均低于正常对照组(P<0.05),且30min表达最低,12h表达最高;(3)Ras mRNA在Kcl刺激诱导后30min表达最低,3h表达最高,在6h、12h较正常对照组表达差异无统计学意义(P>0.05);(4)Raf mRNA在Kcl刺激诱导后30min、6h、12h表达均低于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05);(5)MEKmRNA在刺激诱导后3h表达最高,在30min、6h、12h表达均低于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05);(6)ERK1在Kcl刺激诱导后30min、12h表达均低于正常对照组(P<0.05),在3h表达最高,在6h的表达下降,且与正常对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);(7)ERK2在Kcl刺激诱导后30min、12h表达均低于正常对照组(P<0.05),在3h表达最高,在6h表达下降,且与正常对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);(8)PI3K在Kcl刺激诱导后30min、12h表达均低于正常对照组(P<0.05);在3h、6h表达均高于正常对照组(P<0.05),且3h表达最高;(9)Akt在Kcl刺激诱导后3h表达最高,在30min、6h、12h表达均低于正常对照组(P<0.05);(10)P27kip在Kcl刺激诱导各时间点表达均低于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05);(11)Bim在Kcl刺激诱导12h的表达低于正常对照组(P<0.05),30min、3h、6h的表达与正常对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。在大鼠脑皮质组织中:(1)FoxO3a、Raf、ERKl、PI3K、Akt、P27kip及Bim在胚胎不同发育时期脑皮质组织中表达差异有统计学意义(P<0.05);(2)Ras、MEK、ERK2在胚胎不同发育时期脑皮质组织中表达差异无统计学意义(P>0.05);结论:FoxO3a的表达与Kcl刺激时间长短有关,其表达升高及与上下游基因的相互作用对胚胎期脑皮质神经细胞早期反应中的活动功能具有重要作用。
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