树脂固定化木聚糖酶及其酶解动力学研究

来源 :河南农业大学 | 被引量 : 11次 | 上传用户:a4253272566
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本文主要研究了利用离子交换树脂固定木聚糖酶进行制备低聚木糖,包括固定化载体的选择、固定化条件的优化、固定化酶的酶学性质以及低聚木糖的制备等几个方面。主要研究内容和结果如下:1.开发设计性能优异的载体是固定化技术研究的重要课题之一。本研究从15种工业广泛应用的树脂中筛选出对商品木聚糖酶固定化效果良好的载体:阴离子交换树脂D280。2.以阴离子交换树脂D280为载体,戊二醛为交联剂,对固定化商品木聚糖酶的吸附和交联条件进行了优化,结果表明:加酶量270U╱g湿树脂,吸附pH5.3,吸附温度20℃,吸附时间5h;交联剂戊二醛(终)浓度0.5%(w/v),交联时间1h,交联温度20℃。获得的固定化酶活力可达85 U/g(载体),固定化酶回收率为31.48%。3.固定化酶的酶学性质:固定化酶最适作用温度为60℃,比游离酶低5℃:固定化处理后使酶的热稳定性大大提高。固定化酶最适作用pH4.8,比游离酶降低了0.5个单位;整体来看,pH稳定性变化不明显,固定化酶稍优于游离酶。固定化酶的Km=3.4mg·ml-1,游离酶的Km=2.15mg·ml-1,这说明该固定化酶对底物的扩散有一定的阻碍作用,酶与底物的亲和力减弱。金属离子Ca2+、Zn2+、Fe3+、NH4+、Cu2+对固定化酶水解有不同程度的抑制作用,Ba2+、Mn2+等对活性基本没有影响,而Ag+、Pb2+则使酶完全失活,Na+、K+、Mg2+、Co2+对酶活有激活作用,金属螯合剂EDTA也有助于激活酶活。固定化酶在4℃冰箱内的贮存稳定性与游离酶相比显著增强。固定化酶在反应6次以后仍能够保持80%以上的酶活力,显示出具有良好的批次操作稳定性,在pH5.3、55℃条件下,固定化酶经过反复使用25d后,固定化酶活力下降到初始酶活力的61%,操作半衰期约为30d,具有较好的操作稳定性。4.固定化木聚糖酶水解玉米芯木聚糖的条件为:玉米芯木聚糖浓度2%、加酶量240U·g-1(玉米芯木聚糖)、水解时间12小时可获得良好的水解效果。该试验证实树脂交联吸附法可以制备活力回收率较高的固定化木聚糖酶,并且具有较好的操作稳定性,具有进一步加深研究的前景。
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