色谱法分离泽泻降血糖活性成分的研究

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作为最常用的中药之一,泽泻具有多种生物活性。本文以江西产泽泻为对象,研究了其降血糖活性成分,并对泽泻梗进行了初步研究。本文的主要工作和结果如下:1.采用国标方法测定泽泻梗的营养成分,用化学比分法和氨基酸比值系数法对其蛋白质的营养价值进行评价,此外,还对其粗提物抑制α-葡萄糖苷酶的活性进行了测定。结果表明:泽泻梗(每100g干样)含粗蛋白26.10g、粗脂肪2.20g、总膳食纤维27.56g、灰分8.70g、多糖4.22g、还原糖4.87g、维生素C406.30mg、胡萝卜素380.00μg。泽泻梗蛋白质组成中必需氨基酸/总氨基酸(EAA/TAA)为39.54%、必需氨基酸/非必需氨基酸(EAA/NEAA)为60.46%,鲜味氨基酸占总氨基酸含量的40%以上;其第一限制性氨基酸为含硫氨基酸(蛋氨酸和胱氨酸)。浓度为500μg/mL的泽泻梗水提醇沉物、泽泻梗醇提物的α-葡萄糖苷酶抑制率分别为43.75%、39.90%。2.运用常压硅胶柱层析、中压制备柱和薄层层析等多种方法对泽泻正丁醇萃取组分进行纯化,首次从泽泻中分离得到了腺嘌呤和丁二酸,并得到了实验室前期工作中也得到的尿嘧啶;其中,尿嘧啶和腺嘌呤在泽泻正丁醇萃取组分的不同洗脱液中均有发现。3.应用α-葡萄糖苷酶和猪胰腺α-淀粉酶活性的抑制实验,考察了泽泻提取物和单体物质组合的降血糖活性。经实验得出,丁二酸、腺嘌呤、Fr3.7具有一定的α-葡萄糖苷酶抑制活性和较低的α-淀粉酶活性;尿嘧啶+胸苷、鸟苷+胸苷、丁二酸+腺嘌呤间组合具有较高的α-葡萄糖苷酶抑制活性、而α-淀粉酶抑制活性较低。4.利用Lineweaver-Burk直线和Dixon图,研究了腺嘌呤和丁二酸的α-葡萄糖苷酶抑制作用类型。结果表明,腺嘌呤、丁二酸为在α-葡萄糖苷酶抑制实验的最佳反应时间为10min、最佳添加体积为10μL、15μL;腺嘌呤、丁二酸对α-葡萄糖苷酶的抑制类型均为混合型,随着腺嘌呤、丁二酸浓度的增加,α-葡萄糖苷酶与底物的亲和力均升高,但α-葡萄糖苷酶与底物反应的最大速率均降低;腺嘌呤与α-葡萄糖苷酶的亲和力低于丁二酸。
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