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前言过氧化物酶体增殖物激活受体γ(Peroxisome Proliferator Activated Receptory, PPARγ)属于核受体超家族,能够调节基因的表达。其激活被认为具有潜在的肿瘤抑制作用。目前,已经在多种肿瘤中发现PPARγ表达的下调,食管癌和肺癌中PPARγ表达的降低被认为与患者预后较差有关。PPARγ辅助活化因子1 (PPARγCoactivator-1, PGC-1)家族成员是PPARγ的辅助活化因子,包括PGC-1α, PGC-1β和PGC-1相关辅助活化因子(PGC-1 Related Coactivator, PRC)。PGC-1的活动影响着PPARγ的转录活性。此外,由于PGC-1在控制线粒体生成,活性氧分子(Reactive Oxygen Species, ROS)代谢等方面的重要作用,也很可能通过不依赖PPARγ的途径对肿瘤的发生发展产生着影响。由于PPARγ人工合成配体对人体的副作用较小,因此探讨PPARγ及其辅助活化因子PGC-1在胃癌中的表达很可能对胃癌的化学预防与治疗具有重要的意义,而对PGC-1作用的探讨则很可能帮助研究者更深入地理解肿瘤发生发展与细胞能量代谢相关活动之间的关系。目的采用免疫组化以及蛋白免疫印迹方法,检测分析PPARγ与PGC-1在胃癌中的表达及关系,探讨其与胃癌肿瘤临床病理因素以及患者临床预后之间的关系。材料与方法临床资料：收集中国医科大学附属第一医院肿瘤外科手术切除胃癌标本179例,68例正常胃粘膜,23例慢性萎缩性胃炎,41例肠上皮化生以及15例异型增生中的表达。标本离体后尽快取材,10%甲醛固定24h,取材组织厚4mm,常规组织处理、石蜡包埋,制成目标蜡块,做4pm组织切片,用于目标组织定位。采用组织芯片制作仪将胃癌及其癌前病变以及配对正常胃粘膜等目标组织构建于组织芯片蜡块中,行4μm连续切片,备用。16例胃癌患者的胃癌组织及配对正常组织样本用于蛋白免疫印迹分析PGC-1蛋白的表达。免疫组化染色与结果判定：用PV9000法检测PPARγ及PGC-1的表达情况。PV9000试剂盒购自北京中杉生物公司。兔抗人PGC-1多克隆抗体购自美国Cayman公司,PPARγ鼠抗人单克隆抗体购自美国Santa Cruz公司。采用柠檬酸修复液(pH6.0)高压修复抗原,PBS替代一抗做阴性对照。结果判定：PGC-1、PPARγ免疫组化染色采用DAB显色系统显色,PGC-1、PPARγ蛋白阳性为棕黄色颗粒定位于细胞浆和／或细胞核。免疫组化结果由两位观察者采用盲法每个病例随机选择2个高倍视野,计数200个细胞,按照阳性细胞数占同类细胞数的比例,进行等级划分。结果采用半定量计分方法,根据细胞染色强度(A)和染色细胞所占的比例(B)两者乘积来判定。即：(A)：染色强度按下列标准评定记分：0分为无色；1分为浅黄色；2分为棕黄色；3分为棕褐色(B)：染色的阳性细胞占比例按下列标准评定记分：0分为阴性细胞或弱阳性细胞<5%,1分为阳性细胞占5～10%,2分为阳性细胞占11%～50%,3分为阳性细胞51%～75%,4分为阳性细胞>75%。两种评分相乘(A×B),将结果分为：0分为阴性(-)；1～4分为弱阳性(+)；5～8分为中度阳性(++)；9～12分为强阳性(+++)。蛋白免疫印迹与结果判定：绘制蛋白标准曲线,提取总蛋白并测定蛋白浓度。将所有样品稀释至目标浓度-20℃保存。制备10%SDS-PAGE凝胶,加样后120V电泳。恒定电压100V下转膜2小时,室温封闭1小时。将PGC-1一抗用TBST稀释至1：200,将膜置于孵育袋中4℃下孵育过夜。用TBST配置按1：10000配置二抗,室温下孵育1-2h,进行ECL发光。结果判定：对成像结果进行扫描,并使用QUANTITY ONE 4.6采集数据。每次检测时都检测β-actin。用PGC-1与β-actin的比值作为PGC-1相对表达水平,并进行统计学分析。结果PPARγ和PGC-1在正常胃粘膜中的阳性率(72.06%,69.12%)明显高于胃癌中的阳性率(54.75%,49.16%, P<0.05)。PPARγ的表达与胃癌组织学分型、Borrmann分型及Lauren分型有关P<0.05,而PGC-1表达则与组织学分型和Lauren分型有关,P<0.001。PPARγ与PGC-1在管状腺癌中的表达随着分化程度降低而减少,并且在肠型胃癌中的表达均高于弥漫型与混合型。PPARγ和PG-C-1在发生淋巴结转移的胃癌中的阳性率(46.46%,54.33%)与未发生淋巴结转移胃癌中的阳性率(55.77%,55.77%)没有明显差异,P>0.05。在蛋白免疫印迹分析中,PGC-1在胃癌中的表达水平明显低于对照正常组织(55.94±10.27 vs.104.38±11.65,P=0.004)。此外,胃癌中PPARγ和PGC-1的表达呈正相关(rk=0.422, P<0.001)。PPARγ阴性和阳性的患者五年生存率分别为27.3%和38.1%,生存时间分别为29.6±9.5months和37.8±9.2 months,差异无统计学意义(P=0.249, log-rank检验)。PGC-1阴性和阳性的患者五年生存率分别为26.1%和40%,生存时间分别为29.8±8.9months和38.4±10.2months,差异同样没有统计学意义(P=0.275, log-rank检验)。结论与正常胃粘膜相比,胃癌组织中存在着PPARγ和PGC-1表达的下调。PPARγ和PGC-1的下调与胃癌的特定临床病理因素相关,可能在胃癌发展过程中发挥着重要作用。本研究没有显示PPARγ和PGC-1的表达与胃癌患者的预后密切相关。PPARγ和PGC-1在胃癌中的表达呈正相关,说明二者在影响胃癌的发生发展过程中存在着相互作用,但是其分子机制有待进一步研究证实。