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慢性鼻-鼻窦炎是一种鼻黏膜慢行炎症性疾病,发生在鼻腔和鼻窦.在急性病例中更为常见,通常表现为多个鼻窦的同时受累.慢性鼻-鼻窦炎是一种严重影响患者生活质量的疾病,病程的持续时间越长会加重患者的呼吸道感染症状,严重者甚至引起颅、眼、肺等器官并发症的发生.慢性鼻-鼻窦炎是耳鼻喉头颈外科中最常见的疾病之一,近年来,慢性鼻-鼻窦炎的发病率呈上升趋势.在上呼吸道中,慢性鼻-鼻窦炎的主要临床表现是反复、持续性鼻塞和长期大量流涕(清涕或脓涕),具有"黏液素高分泌性疾病"的特点.目前,对慢性鼻-鼻窦炎发病机制的研究逐步深入,但慢性鼻-鼻窦炎的发病机制尚仍不十分明确,已有研究表明慢性鼻-鼻窦炎的发生、发展是一个复杂的生物学过程,是多方面因素共同作用的结果,根据浸润细胞的不同可分为不同的小类:例如嗜酸细胞浸润型慢性鼻窦炎等.慢性鼻-鼻窦炎的发病常常合并鼻息肉等常见鼻内症状,这也增加了慢性鼻-鼻窦炎疾病发病的复杂性及多样性.近年来,在慢性鼻-鼻窦炎的基础研究中,三叶因子、黏蛋白在慢性鼻-鼻窦炎发生、发展中的作用逐渐引起学者的关注.三叶因子3(TFF3)、黏蛋白MUC5AC(mucin 5AC,MUC5AC)、黏蛋白MUC5B(mucin 5B,MUC5B)在慢性鼻-鼻窦炎(chronic rhinosinusitis)中各亚型:嗜酸粒细胞性慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉(eosinophilic chronic rhinosnusitis with nasal polyps,EOS-CRSwNP);非嗜酸粒细胞性慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉(non-eosinophilic chronic rhinosnusitis with nasal polyps, Non-EOS-CRSwNP);慢性鼻-鼻窦炎不伴鼻息肉(chronic rhinosnusitis without nasal polyps,CRSsNP)中的表达及其在慢性鼻-鼻窦炎中三者的相互作用关系尚未有相关报道,同时如何参与形成上皮的黏膜屏障尚未见报道.本研究检测了慢性鼻-鼻窦炎各亚型中TFF3、MUC5AC、MUC5B的表达及组织定位情况,验证了TFF3与MUC5AC、MUC5B之间表达的协同作用关系,结果表明各亚型之间表达存在统计学差异,初步探讨慢性鼻-鼻窦炎中TFF3与黏液之间的作用关系及对黏膜屏障的作用.
目的:
1.明确慢性鼻-鼻窦炎各亚型中TFF3、MUC5AC、MUC5B的表达与分布;
2.验证慢性鼻-鼻窦炎中TFF3与MUC5AC、MUC5B的协同作用;
3.初步阐明慢性鼻-鼻窦炎中两者对黏膜屏障的影响.
方法:
选取鼻中隔偏曲(Control)患者10例、慢性鼻-鼻窦炎不伴鼻息肉(CRSsNP)患者10例、嗜酸性慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉(EOS-CRSwNP)和非嗜酸性慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉(Non-EOS-CRSwNP)患者各10例的石蜡组织切片,利用免疫荧光双染技术检测各组TFF3、MUC5AC、MUC5B的表达及分布情况.选取相同患者的黏膜组织,通过蛋白印迹法(Western blot)检测各组黏膜组织中TFF3、MUC5AC、MUC5B的蛋白表达;利用免疫共沉淀技术(Co-Immunoprecipitation)检测TFF3与MUC5AC、MUC5B的共结合情况,明确其协同作用关系.
结果:
1.免疫荧光双染法检测TFF3、MUC5AC主要共同表达在慢性鼻-鼻窦炎组织的黏膜上皮和杯状细胞.MUC5B主要表达在慢性鼻-鼻窦炎组织的黏膜下腺体中;
2.TFF3在CRSsNP中荧光表达最强;MUC5AC、MUC5B在EOS-CRSwNP中荧光表达最强;
3.Westernblot验证结果表明EOS-CRSwNP、Non-EOS-CRSwNP、CRSsNP中MUC5AC、MUC5B的表达较对照组中的明显升高,且表达具有统计学意义;
4.Westernblot验证结果表明CRSsNP中TFF3的表达与Control组比较具有统计学意义,EOS-CRSwNP、Non-EOS-CRSwNP则无明显统计学意义;
5.Co-Immunoprecipitation验证结果表明CRSsNP中TFF3可与MUC5AC、MUC5B共沉淀,结合形成蛋白复合物协同作用;
6.CRSsNP中TFF3、MUC5AC、MUC5B均上调,且具有统计学差异.
结论:
1.在慢性鼻-鼻窦炎不伴鼻息肉(CRSsNP)中MUC5AC、MUC5B高分泌与TFF3高表达密切相关;考虑TFF3影响MUC5AC、MUC5B的分泌及表达;
2.在慢性鼻-鼻窦炎不伴鼻息肉(CRSsNP)中TFF3分别与MUC5AC、MUC5B共沉淀,两两连接形成蛋白复合物,表明两两间存在协同作用关系;
3.在慢性鼻-鼻窦炎不伴鼻息肉(CRSsNP)中TFF3与黏蛋白协同作用,可能对上皮的黏膜屏障产生影响.
目的:
1.明确慢性鼻-鼻窦炎各亚型中TFF3、MUC5AC、MUC5B的表达与分布;
2.验证慢性鼻-鼻窦炎中TFF3与MUC5AC、MUC5B的协同作用;
3.初步阐明慢性鼻-鼻窦炎中两者对黏膜屏障的影响.
方法:
选取鼻中隔偏曲(Control)患者10例、慢性鼻-鼻窦炎不伴鼻息肉(CRSsNP)患者10例、嗜酸性慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉(EOS-CRSwNP)和非嗜酸性慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉(Non-EOS-CRSwNP)患者各10例的石蜡组织切片,利用免疫荧光双染技术检测各组TFF3、MUC5AC、MUC5B的表达及分布情况.选取相同患者的黏膜组织,通过蛋白印迹法(Western blot)检测各组黏膜组织中TFF3、MUC5AC、MUC5B的蛋白表达;利用免疫共沉淀技术(Co-Immunoprecipitation)检测TFF3与MUC5AC、MUC5B的共结合情况,明确其协同作用关系.
结果:
1.免疫荧光双染法检测TFF3、MUC5AC主要共同表达在慢性鼻-鼻窦炎组织的黏膜上皮和杯状细胞.MUC5B主要表达在慢性鼻-鼻窦炎组织的黏膜下腺体中;
2.TFF3在CRSsNP中荧光表达最强;MUC5AC、MUC5B在EOS-CRSwNP中荧光表达最强;
3.Westernblot验证结果表明EOS-CRSwNP、Non-EOS-CRSwNP、CRSsNP中MUC5AC、MUC5B的表达较对照组中的明显升高,且表达具有统计学意义;
4.Westernblot验证结果表明CRSsNP中TFF3的表达与Control组比较具有统计学意义,EOS-CRSwNP、Non-EOS-CRSwNP则无明显统计学意义;
5.Co-Immunoprecipitation验证结果表明CRSsNP中TFF3可与MUC5AC、MUC5B共沉淀,结合形成蛋白复合物协同作用;
6.CRSsNP中TFF3、MUC5AC、MUC5B均上调,且具有统计学差异.
结论:
1.在慢性鼻-鼻窦炎不伴鼻息肉(CRSsNP)中MUC5AC、MUC5B高分泌与TFF3高表达密切相关;考虑TFF3影响MUC5AC、MUC5B的分泌及表达;
2.在慢性鼻-鼻窦炎不伴鼻息肉(CRSsNP)中TFF3分别与MUC5AC、MUC5B共沉淀,两两连接形成蛋白复合物,表明两两间存在协同作用关系;
3.在慢性鼻-鼻窦炎不伴鼻息肉(CRSsNP)中TFF3与黏蛋白协同作用,可能对上皮的黏膜屏障产生影响.