【摘 要】
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多项研究发现AGR2蛋白在大部分腺癌中均有过量表达,且与多种肿瘤表征有关。已有文献报导,AGR2可作为乳腺癌前期的检测指标,同时也成为了多种癌症中最具有潜力的靶点蛋白之一。实验室前期已构建出用于转染CHO细胞的人源化抗AGR2抗体18A4的质粒,然而用动物细胞生产出的抗体耗费周期长,成本高,产量较低。本研究利用植物表达体系生产药用蛋白有着可规模化,生产周期短,较安全可靠等诸多优点。美国FDA首次批
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多项研究发现AGR2蛋白在大部分腺癌中均有过量表达,且与多种肿瘤表征有关。已有文献报导,AGR2可作为乳腺癌前期的检测指标,同时也成为了多种癌症中最具有潜力的靶点蛋白之一。实验室前期已构建出用于转染CHO细胞的人源化抗AGR2抗体18A4的质粒,然而用动物细胞生产出的抗体耗费周期长,成本高,产量较低。本研究利用植物表达体系生产药用蛋白有着可规模化,生产周期短,较安全可靠等诸多优点。美国FDA首次批准的用于治疗戈谢病的重组药用蛋白Elelyso就是采用悬浮胡萝卜细胞大批量生产的。本课题的目的之一则是构建出用于转染植物的表达18A4抗体的质粒并对其进行优化。研究结果显示所构建出的质粒能通过western blotting试验成功地检测到抗体18A4的表达,且优化后的质粒抗体表达量明显提高。植物生产药用蛋白虽有诸多优势,但其表达出的蛋白的糖基化结构与人的不尽相同。植物的则多出木糖（Xylose）与岩藻糖（Fucose）结构,为了避免糖基化的差异而导致的可能产生的不良反应,本研究的另一目的则是利用CRISPR/Cas9技术敲除悬浮胡萝卜细胞基因组中的木糖与岩藻糖的转移酶基因。本研究已成功构建出用于转染胡萝卜细胞的CRISPR/Cas9质粒,且在体外试验中成功的检测到g RNA的活性。本研究的结果将对于植物表达药用蛋白和正确建立无XylT和FucT基因表达的悬浮胡萝卜细胞株具有重大意义。
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