核桃外果皮多酚提取纯化及抗氧化活性研究

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以核桃外果皮为研究对象,对核桃外果皮多酚提取与纯化工艺、抑菌及抗氧化活性进行了研究。分别采用超声波辅助提取法和酶提取法提取核桃外果皮多酚,研究了核桃外果皮颗粒度、提取次数、料液比、提取时间、提取温度、纤维素酶及果胶酶液浓度、酶液pH值等因素对核桃外果皮多酚得率的影响;通过9种大孔吸附树脂对核桃外果皮多酚提取液的静态吸附和解吸附试验,筛选出纯化核桃外果皮多酚的最优树脂,对该树脂的上样浓度、提取液pH值、上样量、上样流速、洗脱剂浓度、洗脱剂用量、洗脱流速等因素进行研究,考察该树脂对核桃外果皮多酚的吸附和解吸效果;采用滤纸片法,研究核桃外果皮多酚对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、斯坦利沙门氏菌、酵母菌的抑菌效果;以Vc为对照,通过核桃外果皮多酚对DPPH·自由基、超氧阴离子自由基和羟自由基的清除能力以及还原能力的测定,研究其体外抗氧化效果;采用昆明种小鼠进行动物体内抗氧化试验,通过低、中、高三个剂量组核桃外果皮多酚纯化物对小鼠进行灌胃,对小鼠血清、肝脏组织中蛋白质含量、GSH-PX、SOD活性、MDA的含量测定,研究核桃外果皮多酚体内抗氧化能力。结果表明:四种提取核桃外果皮多酚的最优工艺条件为:超声波辅助提取法:提取温度50℃,提取时间30min,乙醇溶液浓度40%,料液比1:20,核桃外果皮总多酚得率为0.70%;果胶酶法提取:酶解时间120min,加酶量0.5%(果胶酶质量/核桃外果皮粉质量),pH值5.0,酶解温度40℃,料水比1:20,多酚得率为0.63%;纤维素酶法提取:加酶量1.28%,酶解温度40.29℃,酶解时间115.20min,多酚得率为0.73%;纤维素酶和果胶酶复合酶法提取:果胶酶:纤维素酶(v/v)=1:3(酶溶液浓度0.02g/mL),酶解温度50℃,酶解时间90min,pH值4.0,料水比1:20,多酚得率为0.75%;复合酶法提取的多酚得率最高,其次为纤维素酶法提取,再次为超声波辅助提取,果胶酶法提取的多酚得率最低。复合酶法提取的多酚得率比超声波辅助提取仅多0.05%,而且耗时较长,成本较高,综合考虑选择超声波辅助提取法提取核桃外果皮多酚。筛选出最优大孔吸附树脂为HZ-801,最优纯化工艺为:上样流速2BV/h,上样体积6BV,上样液浓度6.68μg/mL,解吸液乙醇溶液浓度70%,洗脱剂流速2BV/h,洗脱剂体积为70mL在此条件下,提取液多酚含量由纯化前的8%提高到17.68%。在10-100μg/mL浓度范围内,核桃外果皮多酚对DPPH·的清除能力强于Vc;核桃外果皮多酚浓度为100μg/mL时对超氧阴离子自由基的清除率最大;核桃外果皮多酚对羟自由基的清除能力高于Vc;在5-25μg/mL浓度范围内,核桃外果皮多酚的还原能力强于Vc;核桃外果皮多酚对枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的抑制作用最强,对大肠杆菌和沙门氏菌抑制作用较弱,对酵母菌无明显抑制作用。核桃外果皮多酚能显著提高受试小鼠血清、肝脏组织中蛋白质含量、GSH-PX、SOD活性,并且显著降低这些组织中MDA的含量。试验结果表明核桃外果皮多酚具有较强的抗氧化性。
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