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目的探讨白藜芦醇（Resveratrol）抑制内质网应激（Eendoplasmic Reticulum Stress,ERS）保护H9c2细胞的详细作用机制。重点研究锌离子(Zn2+)和线粒体通透性转化孔（Mitochondrial Permeability Transition Pore,m PTP）的作用。方法用DMEM培养基培养H9c2细胞（来源于大鼠胚胎心脏组织）,用ERS诱导剂2-脱氧-D-葡萄糖（2-Deoxy-D-Glucose,2-DG）制备ERS模型。白藜芦醇和氯化锌（ZnCl2）进行药物预处理,Zn2+的螯合剂——四吡啶甲基乙二胺（N,N,N’,N’-Tetrakis Ethylenediamine,TPEN）和蛋白激酶抑制剂在其之前进行作用,si RNAs转染在细胞培养中进行。通过MTT法检测H9c2细胞的活性;通过LDH法检测H9c2细胞的毒性;通过Western blot法检测内质网应激伴侣蛋白葡萄糖调节蛋白78（Glucose Regulated Protein 78,GRP 78）、葡萄糖调节蛋白94（Glucose Regulated Protein 94,GRP 94）和ERS相关凋亡蛋白C/EBP同源蛋白（C/EBP Homology Protein,CHOP）、门冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶12（Cysteinyl Aspartate Specific Proteinase 12,Caspase 12）、氨基末端激酶（Jun N-terminal Kinase,JNK）的表达以及细胞外调节蛋白激酶（Extracellular Regulated Protein Kinases,ERK）、磷脂酰肌醇3激酶（Phosphatidylinositol 3 Kinase,PI3K）/蛋白激酶B（Protein Kinase B,AKT）、糖原合成酶激酶-3β（Glycogen Synthase Kinase-3β,GSK-3β）的磷酸化表达;免疫细胞化学染色技术检测GRP 94和JNK的表达;使用激光共聚焦显微镜选择四甲基罗丹明乙酯（Tetramethylrhodamine Methyl Ester,TMRE）红色荧光染料测量线粒体膜电位（Mitochondrial Membrane Potential,?Ψm）的变化,来衡量m PTP的开放程度;用Newport Green DCF荧光染料检测H9c2细胞内Zn2+的浓度。结果1 Zn2+参与白藜芦醇增加细胞活性、降低毒性的作用。MTT和LDH实验结果显示,与对照组相比,2-DG组H9c2细胞的活性显著降低、细胞毒性显著增强,白藜芦醇预处理明显抑制2-DG引起的变化,但被Zn2+的螯合剂TPEN抑制。2Zn2+参与白藜芦醇抑制ERS及其相关凋亡的作用。Western blot与细胞免疫化学染色结果显示,与对照组相比,2-DG组GRP 78、GRP 94、CHOP、Caspase 12、JNK表达显著增多,白藜芦醇明显抑制2-DG引起的蛋白表达增多,但被Zn2+的螯合剂TPEN抑制。3 Zn2+参与白藜芦醇阻止m PTP开放的作用。共聚焦结果显示,与对照组相比,2-DG组TMRE红色荧光的强度明显降低,即?Ψm降低、m PTP开放,白藜芦醇明显抑制2-DG引起的改变,但同样被Zn2+的螯合剂TPEN抑制。4 ERK/GSK-3β参与白藜芦醇抑制ERS及其相关凋亡、阻止m PTP开放的作用。实验结果显示,与对照组相比,2-DG组GRP 78、GRP 94、CHOP、Caspase 12、JNK表达显著增多,TMRE红色荧光的强度明显降低,白藜芦醇预处理明显抑制2-DG引起的变化,而ERK抑制剂PD98059、GSK-3β抑制剂SB216763、ERK si RNA和GSK-3βsi RNA明显抑制白藜芦醇降低蛋白表达、增强TMRE红色荧光强度的作用,AKT抑制剂LY294002和AKT si RNA对白藜芦醇的作用却无明显改变。此外,白藜芦醇能够明显增加ERK和GSK-3β的磷酸化表达,而对AKT的磷酸化无明显作用。5白藜芦醇能够增加H9c2细胞中Zn2+的含量。共聚焦实验结果显示,与对照组相比,白藜芦醇能够模拟ZnCl2的作用,使Newport Green DCF的荧光强度明显增强,但ERK抑制剂PD98059、GSK-3β抑制剂SB216763、ERK si RNA和GSK-3βsi RNA明显抑制了白藜芦醇的作用,AKT抑制剂LY294002和AKT si RNA对此却无明显改变。结论白藜芦醇通过增多细胞内Zn2+减轻内质网应激及其相关凋亡,阻止m PTP开放保护H9c2细胞。ERK/GSK-3β信号途径参与白藜芦醇的作用,AKT信号通路未参与此过程。图19幅;表2个;参157篇。