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本次研究目的采用免疫磁珠富集分离目标菌株,结合多重PCR变性高效液相色谱技术(DHPLC)和基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF MS),建立高通量快速检测食品中产志贺毒素大肠杆菌O111和O157的研究方法。在本方法中,采用产志贺毒素大肠杆菌O111和O157的标准菌株为代表对象进行方法研究。主要从四个方面进行项目研究,首先对目标菌株进行分离研究:采用免疫磁珠富集分离目标菌株,并验证磁珠的特异性及灵敏度。实际样品检测中,结合药物及显色培养基快速准确分离目标菌株。其次多重PCR-DHPLC检测方法的研究:以rfbE(O157)、wzx(O111)为目的基因,确立多重PCR-DHPLC反应条件及体系,验证该方法的特异性及灵敏度,并与RT-PCR方法进行灵敏度比较,随机抽取270份食品样品进行检测。然后进行MALDI-TOF MS检测方法的研究:分析前期处理方法、培养基种类及培养时间对质谱图造成的影响,采用最佳的方法获取目标菌株的质谱图并添加数据库中。对目标菌株设置不同的培养条件后,验证该方法的准确性。最后解决基质对菌体活性干扰及降解难题,分析其均匀性及稳定性,并在全国范围内开展检测O111和O157的能力验证。在本次目标菌株富集分离研究中,结果表明免疫磁珠具有良好的特异性和灵敏度,可以应用于致病微生物的分离,提高检测效率。在多重PCR-DHPLC实验中,表明多重PCR-DHPLC具有良好的特异性并与RT-PCR具有相同梯度的灵敏度,可以同时检测O111和O157,检测限达到25 CFU/mL。在129份牛肉样品中,检出1例O111和3例O157;74份鸡肉样品中,检出O111和O157各1例;67份蔬菜样品中,并未检测到目标菌。MALDI-TOF MS检测方法中,使用TSB液体培养基培养24-36 h获取目标菌株质谱图,添加数据库后,均鉴定为大肠杆菌。但是由于两种目标菌株质谱图相似,本次实验并没有完全准确鉴定两种目标菌株,需要结合分子及血清学达到精确鉴定的目的。能力验证样品研究中,绿豆粉作为基质,具有良好的均匀性及稳定性。在全国138间实验室组织开展能力验证,检测正确率为98%。