论文部分内容阅读
米槁(Cinnamomum migao H.W.Li)系樟科(Lauraceae)樟属(Cinnamamum)的常绿高大乔木,是我国特有的药用植物。其干燥果实大果木姜子是贵州省十大苗药之一,用于治疗心胃肠方面的疾病,也可治疗胸闷哮喘。米槁还可作为工业原料提炼芳香油。米槁的药用价值导致市场上对米槁果实需求量大,加之米槁种子萌发率低,米槁林中幼树数量少,种群自然繁殖速度缓慢,现已有的米槁扦插繁殖相关研究能够一定程度上解决米槁快速繁殖的技术问题。组织培养能够缩短植物繁殖周期,保护濒危物种及其遗传稳定性,目前并未有米槁组织培养研究结果。本文通过对米槁组织培养进行研究,探寻米槁组织培养中的外植体最佳消毒方式,最佳诱导培养基、最佳增殖培养基、最佳生根培养基的植物激素选择与浓度配比,最佳炼苗方式与移栽基质,建立无菌快速繁殖体系。为米槁工厂化育苗提供了理论依据,丰富米槁的无性繁殖体系。主要研究结果如下:(1)外植体最佳消毒方式。75%酒精消毒30 s+0.1%升汞消毒6.5 min是室内采集的米槁带芽茎段的最佳消毒方式,75%酒精消毒30 s+0.1%升汞消毒7 min是野外采集的米槁带芽茎段的最佳消毒方式。生长在室内的米槁外植体染菌率显著低于野外采集的米槁外植体。以米槁叶片为外植体,最佳消毒方式为:75%酒精消毒30 s+0.1%升汞消毒7 min。不同月份的米槁外植体染菌率、褐化率与成活率均不同,4月采集的米槁带芽茎段污染率最低,11月采集的米槁带芽茎段启动率最高,污染率较低,是米槁组织培养外植体的最佳取材时间。(2)不定芽诱导。6-BA与IBA是最适宜诱导米槁不定芽的两种植物激素,二者均在不定芽诱导中起到重要作用,且IBA的影响作用大于6-BA。不定芽诱导率随6-BA浓度的升高不断增加,IBA浓度不断增加,诱导率先增加后减小。以米槁带芽茎段为外植体诱导不定芽时,最佳诱导培养基为:MS+6-BA 3.0 mg/L+IBA 0.3 mg/L+琼脂6.5 g/L+蔗糖30 g/L,诱导率为81.24%。(3)愈伤组织诱导。6-BA、NAA与2,4-D适宜诱导米槁的愈伤组织。以米槁叶片诱导愈伤组织时,三者对愈伤组织诱导影响的作用顺序为:2,4-D>6-BA>NAA。6-BA与2,4-D是影响愈伤组织诱导率的两个重要因素,低浓度2,4-D、中浓度6-BA与NAA更适宜愈伤组织的诱导。最佳诱导培养基为:MS+2,4-D 1.0 mg/L+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L+琼脂6.5g/L+蔗糖30 g/L,诱导率为88%。(4)增殖培养。6-BA与NAA能够促进米槁不定芽的增殖。NAA是米槁不定芽增殖的主要影响因素,且随NAA浓度的增加,增殖系数不断增加。米槁不定芽最佳增殖培养基为:MS+6-BA 0.1 mg/L+NAA 1.0 mg/L+AC 0.3 g/L+琼脂6.5 g/L+蔗糖30 g/L,增殖系数为2.79。(5)选用IBA、NAA、AC诱导不定芽生根,对诱导生根影响作用的顺序为:IBA>AC>NAA,IBA是影响生根率的最主要因素,低浓度的IBA更容易诱导生根。AC对米槁不定芽的生根有积极的促进作用,米槁外植体最佳生根培养基为:1/2MS+NAA 0.5mg/L+IBA 0.1 mg/L+AC 0.2 g/L+琼脂7 g/L+蔗糖30 g/L,生根率达72.38%。(6)炼苗是生根的组培苗由人工培养环境适应自然生长环境的过程,有助于幼苗成活率的增加。炼苗时间越久,移栽成活率越高,且较早接触空气的组培苗成活率更高。对米槁生根组培苗进行逐渐开盖7 d的炼苗处理,30 d后移栽成活率能达到93.1%。(7)不同苗木有各自适宜的土壤环境,移栽基质可以为苗木生长提供水分和营养物质,保障其成活率与生长情况。河沙:珍珠岩=1:1的移栽基质是米槁幼苗移栽成活率最高的基质,成活率达90.63%,泥炭土:河沙=1:1的基质中米槁幼苗的成活率最低,成活率为75%。泥炭土:蛭石=1:1的基质中,米槁叶片颜色较浅,生长状况一般,幼苗成活率为76.19%。泥炭土:珍珠岩=1:1是米槁幼苗成活率仅次于河沙:珍珠岩=1:1的基质,成活率为84.13%,且此基质中的米槁幼苗生长速度快,长势优良,是最适宜米槁幼苗移栽的基质。