水蛭是一味传统的抗凝血中药。前人已经对一些品种水蛭的化学成分、药理作用及临床应用进行了报道，这些都为进一步研究水蛭提供了依据。过去，人们认为只有吸血的水蛭才有抗凝血活性，只有新鲜的水蛭唾液中才存在抗凝血物质。但是大量的临床实践证明不吸血只吸食贝壳和蛤蚧的蚂蟥(Whitmania pigra Whitman)抗凝血作用非常好，而且该品种水蛭的干燥体是国内水蛭市场的主流品种，也是临床应用的主要水蛭品种。但目前为止，国际上对其化学成分仍没有研究报道，其制剂研究也不成熟，因此，这方面具有很大的研究和开发价值。本研究即从抗凝血活性成分、药材提取工艺及冻干粉针制剂三个方面对蚂蟥(Whitmania pigra)进行了研究：首先，对水蛭的资源品种、化学成分、药理作用、制剂研究及临床应用等方面进行了详细的综述。以血浆复钙时间为指标，对水蛭干燥体的抗凝血活性成分进行了追踪分离纯化。首先从五种溶剂系统中筛选出提取抗凝血活性成分的最佳溶剂系统：试剂Ⅰ—水(40％，v／v)。然后对40％试剂Ⅰ的提取物进行乙醇分级沉淀，得到60％和85％两个乙醇沉淀物，并确定85％的乙醇沉淀为水蛭的抗凝血活性部分。在此基础上，通过阴离子交换色谱、Sephadex G-25和Sephadex LH-20凝胶滤过色谱及反相高压液相色谱分离，从该活性部分中分离得到三个活性多肽。其中化合物1和2在自然条件下互相转化，因此只测定了它们的分子量，分别为7100Da和5531Da。采用HPLC法和SDS-PAGE法确定化合物3为一纯化合物，采用MALDI-TOF-MS法测定出其分子量为8608Da，并测定了其氨基酸组成。确定化合物3为首次分离得到的抗凝血多肽，由于该物质代表了蚂蟥(Whitmania pigra)40％的抗凝活性，因此将其命名为蚂蟥多肽(whitmanin)。以水蛭药材中的whitmanin为指标性成分，通过正交试验考察了试剂Ⅰ的浓度、试剂Ⅰ的用量、提取时间和提取次数4个因素，优化了原料药材水蛭有效成分的提取工艺。确定水蛭药材的最佳提取工艺为：40％的试剂Ⅰ(4倍量)提取4次，每次24h。并通过进一步的单因素试验，确定水蛭提取液的精制工艺为：用60％乙醇沉淀除去杂质后，用85％的乙醇沉淀出抗凝血活性部分，后者的水溶液用0.22μm的微孔滤膜滤过，干燥，即得水蛭活性部位(LI)。采用体外血栓法、纤维蛋白平板法及全血血块法，观察了水蛭活性部位的抗血栓作用；采用家兔血浆复钙时间法、凝血酶时间法及凝血酶原时间法，观察了LI的抗凝血作用。结果表明LI高剂量、中剂量和低剂量组均能明显溶解体外血栓(P＜0.001)、纤维蛋白平板(P＜0.001)和全血凝块(作用显著)；并能显著延长家兔血浆复钙时间、凝血酶时间和凝血酶原时间(P＜0.001)。从而证明本研究所得LI具有较强的抗血栓和抗凝血作用。此外，安全性实验结果表明：LI静脉给药毒性较低，豚鼠无过敏反应，体外无溶血现象，连续给药未发现有出血趋向，证明LI无明显毒副作用。以冻干粉针的成型性、外观色泽、再溶解性、澄明度为评价指标，选择了辅料ML、辅料MR、辅料ME、辅料GS及辅料MHP五种辅料，考察了辅料的种类、辅料的用量及预冻时间对制剂成型性、外观色泽的影响。最终确定4～8％的辅料ML为本冻干制剂的最佳冻干辅料；为了确保制剂在规定的pH值范围内稳定，筛选出0.9％的辅料ME为本制剂的保护剂；以whitmanin为指标，考察了辅料及灭菌方法对有效成分whitmanin含量的影响，确定了注射用水蛭(冻干粉针)的处方及制剂工艺。建立了采用HPLC法对水蛭药材、活性部位及注射用水蛭(冻干粉针)中指标性成分whitmanin的含量测定方法，根据多批次样品的检定结果，制定了水蛭药材、活性部位及注射用水蛭(冻干粉针)中指标性成分whitmanin的含量限幅。对注射用水蛭(冻干粉针)进行了稳定性试验研究，包括影响因素试验、加速试验和长期留样观察试验，初步确定了注射用水蛭(冻干粉针)的储存条件。