啤酒中污染菌的分离纯化、快速检测与鉴定

被引量 : 0次 | 上传用户:asdfghjkc
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
啤酒中污染菌是啤酒生产中不可避免的一种生物污染。准确、快速地检测和鉴定出啤酒中的污染菌不仅能保证啤酒品质,还体现出啤酒企业所具有的高技术水平。随着现代生物技术的发展,污染菌的检测方法也日新月异,现在已经成熟应用的有选择性培养基和5种检测和鉴定方法,它们分别是ATP法、抗原抗体免疫法、PCR扩增法、原位杂交法和D-乳酸脱氢酶的电泳谱图法。本研究的主要内容是使用选择性培养基分离纯化出10种污染菌,根据细菌形态把它们分别编号为Ls、Lm、Ll、Lsuper、Lw、P、4—1、5221、5222、928,利用API50CHL鉴定试剂条把它们分别定义为植物乳杆菌、乳酸菌乳球菌乳亚种、短乳杆菌3、短乳杆菌3、短乳杆菌1、短乳杆菌1、植物乳杆菌2、布氏乳杆菌、食果糖乳杆菌、德氏乳杆菌德亚种、不可判定菌种。为了更准确地鉴定上述细菌,本研究使用了参考引物“27F-907R”作为测序引物,经过实验证明该引物所产生的PCR扩增结果条带单一、清晰明亮。经过测序和网上BLAST软件比对确定Ls属于Lactobacillus plantarum,4-1和5221属于Lactobacillus parabuchneri,Lm、Lw、P和5222属于Lactobacillus perolens,928属于C.beijerinckii,Ll的比对结果则是属于“Uncultured bacterium clone rRNA228 16S ribosomal RNAgene”即不能确定具体的种。但是根据API50CHL的鉴定结果和参考的与自己设计的短乳杆菌特异性引物经过PCR鉴定为短乳杆菌,故确定Ll为Lactobacillus brevis。根据测序的结果设计出三套种鉴定引物,他们分别是Lactobacillus brevis、Lactobacillu parabuchneri和Lactobacillus perolens鉴定引物,然后通过条件优化确定最佳的退火温度和退火时间,它们分别为45℃1min、55℃2min和56℃2min。外加参考的Lactobacillus brevis和Lactobacillus plantarum种特异性引物组成一个种鉴定引物系列。对经过鉴定的污染菌进行抗啤酒花性和啤酒污染性鉴定,经过实验确定Ls、Lm、Ll、Lw、P、4—1、5221、5222、928最大的抗啤酒花浓度依次为L1>928>Lw>5221>Lm、4-1>Ls、P>5222,同时啤酒污染能力的大小顺序依次为Ll、Lw>5221>P>Ls、Lm>5222>4-1。用啤酒花对污染菌进行驯化,最大的驯化浓度大小依次为Ll、Lw>P>Lm>5221、928>4-1、Ls>5222,显然经过驯化后抗啤酒花能力出现了比较大的变化,特别是Lw、P的抗啤酒花性有很大的提高。通过对抗啤酒花基因horA、horB和horC扩增确定了抗啤酒花基因的拷贝数多少依次为Ll、Lw、P、5221>4-1、Ls>5222、Lm,这与最大驯化浓度大小顺序和啤酒污染浓度大小顺序相吻合。最后通过实验确定啤酒花的驯化浓度和horA的拷贝数呈正相关。最后确定horA改良引物的最低检测浓度为21个/mL。
其他文献
类风湿关节炎属于中医学"痹证"范畴。痹证包括现代医学多种风湿免疫性疾病,如类风湿关节炎、强直性脊柱炎、痛风等。文章浅析伏邪理论,从伏邪致痹角度对类风湿关节炎的发病机
目的:探讨失眠症中医不寐五神分型证型中肝不藏魂型与肾不藏志型两证型多导睡眠图(PSG)相关参数的特征性变化,以期为中医不寐五神分型法提供临床证据。方法:选择新疆医科大学
五味子为木兰科植物五味子Schisandra chinensis(Turcz.)Baill.或华中五味子Schisandra sphenan thera Rehd.et Wiles.的干燥成熟果实。前者习称“北五味子”,后者习称“南五味子”,
目的探讨有效及时的检伤和后送转运对地震伤员救治的意义。方法对绵阳市中心医院医疗救援队在九寨沟"8.8"地震发生后8月9日-8月11日对地震伤员的检伤、救治、后送转运、进一
本试验以西北农林科技大学葡萄酒学院选育的酿酒葡萄新品系8804为试材,在陕西杨凌气候管理条件下对该品系的生物学特性、果实和葡萄酒品质进行了研究,为其品种鉴定和示范推广
本文以邢福义先生提出的复句类别的三分系统理论为指导,对我国最早的国别体史书——《国语》一书中的因果类复句进行了穷尽式调查统计,得出《国语》因果类复句共641例。我们
农业是关系国计民生的产业,对于其他产业具有正的外部效应,因此世界各国都非常重视农业的发展。伴随着我国经济的高速发展,我国农产品贸易的地位有所下降,同时,我国农产品贸易也呈
本文首先对莱州湾南岸第四纪滨海相地下卤水的特征以及该地区的地质、地貌进行了概括和总结,并综合前人关于渤海地区晚第四纪环境演变的研究以及莱州湾E孔资料,分析了本区晚
我国大量由于煤炭燃烧而导致的SO2排放造成了严重的大气污染,另一方面我国的硫资源相对比较缺乏。为了有效地解决这两个问题,就需要开发回收利用型SO2脱除方法。本文实验研究了
目的探讨声触诊组织成像量化(VTIQ)与声触诊组织成像(VTI)对甲状腺实性小结节良恶性的鉴别诊断价值。方法对57例患者共73个甲状腺实性小结节(直径<10mm)术前行常规超声、VTI