育龄期女性的子宫内膜正常情况下在月经周期随雌激素、孕激素的影响呈现增殖期、分泌期交替的现象。但是由于先天因素、病理因素或人工因素对子宫内膜的破坏和损伤,造成部分育龄期女性的子宫内膜始终过薄,称之为薄型子宫内膜,影响胚胎着床,在辅助生殖技术中尤其常见。目前,改善薄型子宫内膜的方法有多种：药物治疗、手术治疗、干细胞移植等。其中药物治疗较为常用,且效果得到了大家的肯定,手术治疗也在一定程度上可以解决部分患者的薄型子宫内膜的问题,但干细胞移植目前尚处于研究阶段,未应用于临床。研究显示成体干细胞可在体外培养条件下向子宫内膜细胞诱导分化,也有学者将成体干细胞移植入薄型子宫内膜鼠模型体内,观察到了子宫内膜的改善。本实验依托郑州大学第一附属医院生殖医学中心这一平台,有获取胚胎干细胞的便利条件,通过摸索胚胎干细胞向子宫内膜细胞诱导分化条件,为治疗薄型子宫内膜打下实验基础。目的摸索人胚胎干细胞向子宫内膜样细胞诱导分化条件,比较不同诱导方案的优劣。方法1.采用不同的手术方式获取子宫内膜,分别经过分离、培养、纯化、鉴定,将获得的子宫内膜基质细胞冻存备用。分析子宫内膜组织来源是否影响子宫内膜基质细胞的获取。2.本实验室已成功建系并经过鉴定的人胚胎干细胞体外培养、传代扩增,供诱导分化用。3.按照诱导分化条件的不同,将实验对象分为3组：自发分化组、单纯诱导分化组、共培养分化组。诱导分化分为2个阶段。4.分析诱导分化终末阶段3组细胞角蛋白、波形蛋白表达情况(免疫荧光法),采用RT-PCR法验证诱导分化终末阶段细胞的基因表达。结果1.子宫内膜诊刮来源的子宫内膜组织来获得较多量的子宫内膜基质细胞。2.诱导分化过程中,克隆形态随诱导分化的时间发生改变。3.诱导分化终末阶段,免疫荧光鉴定显示：共培养诱导分化组、单纯诱导分化组角蛋白表达阳性,波形蛋白表达阴性；自发分化组角蛋白及波形蛋白表达均阳性。对3组角蛋白表达的平均免疫荧光强度进行分析,3组间平均免疫荧光强度差异有统计学意义(P<0.05),再进行两两比较,共培养分化组与单纯诱导分化组、自发分化组差异有统计学意义(P<0.05),单纯诱导分化组与自发分化组差异无明显统计学差异(P>0.05)。RT-PCR结果显示角蛋白基因表达阳性,Hoxa10及雌激素受体(estrogen receptor,ER)基因未见明显条带。结论1.子宫内膜组织量影响子宫内膜基质细胞的获得。2.人胚胎干细胞在诱导分化条件下可以向子宫内膜样细胞分化,在自发分化条件下同时向间质细胞和上皮细胞分化。3.17-p雌二醇、TGF-α、EGF、PDGF-BB等化学试剂及细胞因子可以诱导人胚胎干细胞向子宫内膜样细胞分化。共培养条件下,人胚胎干细胞向子宫内膜样细胞分化的效果较单纯诱导条件下进一步提高。