【摘 要】
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目的:探讨黄芪甲苷(AST)对过氧化氢(H202)诱导动脉平滑肌细胞(ASMCs)凋亡的抑制作用及相关机制 方法:以H202损伤ASMCs来建立凋亡模型,用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法测定细胞
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目的:探讨黄芪甲苷(AST)对过氧化氢(H202)诱导动脉平滑肌细胞(ASMCs)凋亡的抑制作用及相关机制 方法:以H202损伤ASMCs来建立凋亡模型,用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法测定细胞活性,得出合适的H202浓度与作用时间来建立模型,然后按不同分组要求,先用10、20、40、80、160μg/ml黄芪甲苷预处理细胞1h后,再用0.5mmol/L H202予以处理6h,用吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)染色观察细胞形态的变化,细胞 DNA片段化分析检测DNA降解情况,流式细胞术检测细胞凋亡率和Western blot检测Bcl-2、Bax、 p-Jak2及 Caspase-9蛋白表达的变化。AG490阻断Jak2磷酸化后观察各组p-Jak2的变化。 结果:以H202损伤ASMCs来建立凋亡模型,用0.5mmol/L H202作用ASMCs6h后,细胞存活率为51.43±3.98%,AO/EB染色观察到凋亡细胞增多,细胞DNA呈典型的凋亡“梯形条带”,达到较为理想的造模效果。而不同浓度的AST对细胞均有不同程度的保护作用。先用AST预处理ASMCs1h,再用0.5 mmol/L H202作用ASMCs6h后,AST在40μg/ml时可以达到较好的保护效果,细胞凋亡率由48.31±2.72%下降到3.05±0.85%,染色观察到AST处理组中细胞,与正常组和保护细胞的羟乙基葛根素组中的细胞形态相似,说明 AST可以很好地保护细胞结构,维持细胞的正常形态,以上各组细胞 DNA片段化分析均无凋亡“梯形条带”出现。最后Western blot结果显示AST上调Bcl-2、下调Bax、p-Jak2和Caspase-9蛋白表达,为了阻断 Jak2磷酸化为 p-Jak2,我们先用100μmol/L AG490预处理细胞12h,然后照以上同样处理,结果各实验组中p-Jak2蛋白表达大幅下降,接近正常组水平,提示Jak2可能是AST发挥抗氧化药效的作用靶点。 结论:AST有抑制H202诱导动脉平滑肌细胞凋亡的作用,AST的保护机制与上调Bcl-2,下调Bax、p-Jak2和Caspase-9蛋白表达有关。
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