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背景与目的:子宫内膜接受态是子宫内膜呈现接受胚胎的能力,受到许多因素调节,例如激素、黏附分子、生长因子和受体等。糖基化是重要的蛋白质翻译后修饰的方式之一,与许多生理过程和疾病密切相关。糖基转移酶(glycosyltransferases)及其催化产物在子宫内膜接受态的建立过程中呈阶段特异性的表达,影响子宫内膜和胚胎之间的识别黏附。唾液酸转移酶β-galactoside-α2,3-sialyltransferase III(ST3Gal3)是合成sialyl Lewis X(sLeX)寡糖的关键酶,但是ST3Gal3在子宫内膜接受态建立过程中的表达和功能未见报道。本研究中,通过比较人子宫内膜增生期与分泌期ST3Gal3的表达,发现ST3Gal3与子宫内膜接受态的相关性;利用小鼠妊娠模型,确证ST3Gal3在子宫内膜接受态建立中的作用。本研究通过对ST3Gal3在子宫内膜接受态建立中的作用研究,以期为着床糖生物学提供更深刻的理解。方法:1.通过Real-time PCR和Western blot方法检测人子宫内膜增生期和分泌期以及HEC-1A(低接受态)和RL95-2(高接受态)细胞中ST3Gal3、ST3Gal4和ST3Gal6的mRNA和蛋白质水平。2.通过免疫组织化学染色检测人子宫内膜增生期和分泌期ST3Gal3、ST3Gal4和ST3Gal6的表达水平。3.利用Real-time PCR、Western blot检测ST3Gal3-siRNA的转染效率,通过凝集素印记、蛋白质印记和免疫荧光检测ST3Gal3的生成产物α2,3-唾液酸和sLeX的表达。4.通过CCK8、EdU检测ST3Gal3对细胞生长的影响。5.通过扫描电镜以及细胞黏附实验检测下调ST3Gal3以及唾液酸苷酶(Neuraminidase)处理细胞对RL95-2细胞的黏附能力的影响。6.检测小鼠怀孕从第一天到第五天的ST3Gal3、α2,3-唾液酸和sLeX的表达情况;通过小鼠怀孕第三天子宫角注射ST3Gal3-siRNA和sLeX抗体,第8天收集样品,根据胚胎数量检测胚胎着床效率。结果:1.增生期和分泌期的子宫内膜组织比较ST3Gal3、ST3Gal4和ST3Gal6的mRNA和蛋白质水平。结果显示ST3Gal3和ST3Gal6在分泌期的子宫内膜组织中高表达,增生期子宫内膜低表达,ST3Gal4没有明显的差异。2.检测两种人子宫内膜细胞系HEC-1A,RL95-2细胞的ST3Gal3、ST3Gal4和ST3Gal6的mRNA和蛋白质水平。结果显示,RL95-2细胞ST3Gal3的mRNA表达水平是HEC-1A细胞的3.04倍,蛋白质是2.52倍。3.将scramble siRNA、ST3Gal3 siRNA1和ST3Gal3 siRNA2瞬时转染至RL95-2细胞。检测ST3Gal3的mRNA和蛋白质水平,结果显示与scramble siRNA比较,转染ST3Gal3 siRNA后ST3Gal3表达降低。且转染ST3Gal3 siRNA后抑制了α2,3-唾液酸化和sLeX的合成。4.CCK8、EdU检测结果显示:敲低ST3Gal3后抑制子宫内膜细胞生长和DNA合成。实验检测发现敲低ST3Gal3后抑制了PCNA,Cyclin D1和Cyclin E1,但是增加了P21 Cip1的表达。5.细胞黏附实验结果显示:转染ST3Gal3 siRNA后,胚胎细胞与子宫内膜细胞的黏附率显著降低,扫描电镜检测发现敲低ST3Gal3和NEU处理RL95-2细胞后,细胞表面微绒毛的形成减少。6.收集未孕和怀孕1-5天的小鼠子宫内膜,通过检测发现在小鼠怀孕第4天ST3Gal3、α2,3-唾液酸化和sLeX的表达量最高。7.小鼠怀孕第三天分别向子宫角注射ST3Gal3 siRNA和sLeX抗体,怀孕第八天观察小鼠子宫,结果显示与对照组相比ST3Gal3 siRNA或者sLeX抗体注射抑制着床率。结论:1.ST3Gal3在分泌期人子宫内膜以及高接受态的RL95-2细胞中高表达。2.下调ST3Gal3抑制RL95-2细胞的增殖和接受能力。3.小鼠子宫内膜中的ST3Gal3/sLeX寡糖促进胚胎着床。