异鼠李素对H2O2损伤的内皮细胞的保护作用

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目的:观察异鼠李素对H2O2所致人脐静脉内皮细胞株CRL-1730氧化性损伤的保护作用及其作用机制。方法:采用体外培养的人脐静脉内皮细胞株CRL-1730,用MTT法筛选H2O2致细胞损伤的最佳浓度,MTT法筛选阳性药丹参注射液最佳浓度及异鼠李素高、中、低各组浓度范围;用不同浓度的异鼠李素与培养的CRL-1730细胞共同孵育24h,再用H2O2氧化损伤4h后,用MTT法测异鼠李素对H2O2损伤的细胞活性的影响,并用流式细胞仪测定异鼠李素对H2O2损伤的细胞周期及细胞凋亡的影响;ELISA法检测内皮细胞培养液组织性纤溶酶原激活物(t-PA)和纤溶酶原激活物抑制物(PAI-1)含量以及血管性血友病因子(vWf)和血栓调节蛋白(TM)含量。结果:1.当H2O2浓度在200μmol/L到300μmol/L之间时,内皮细胞活性抑制率为40%-60%之间,此时内皮细胞活性被抑制的程度,能更有效的观察药物作用,因此选择250μmol/L为制备内皮细胞H2O2损伤的浓度。2.异鼠李素能够剂量依赖性增强CRL-1730细胞活性,与模型组比较,高剂量组有显著性差异(P<0.01),中剂量组差异有统计学意义(P<0.05),低剂量组无明显影响。3.异鼠李素能够剂量依赖性减少受损细胞的凋亡,降低早期凋亡率。异鼠李素能抑制H2O2引起的CRL-1730细胞凋亡,表现在使G0/G1期细胞比例减少,S期和G2/M期细胞比率增加。4.与H2O2损伤后的模型组相比,异鼠李素高剂量组可以使t-PA分泌明显增加(P<0.01),抑制PAI-1的分泌(P<0.05),升高t-PA和PAI-1的比值。5.与H2O2损伤后的模型组相比,异鼠李素高剂量组可以使培养液中vWf减少(P<0.05)。6.与H2O2损伤后的模型组相比,异鼠李素高剂量组可以使培养液中TM明显减少(P<0.01)。结论:1.选250μmol/L为制备内皮细胞H2O2损伤的浓度,能更有效的观察药物作用。2.异鼠李素能减少H2O2损伤细胞凋亡率,提高内皮细胞增殖活性,使G0/G1期细胞比率明显减少,S期和G2/M期细胞比率明显增加,由此可见,异鼠李素可以有效改善H2O2引起的细胞周期时相的改变,使细胞增殖活力增强。3.异鼠李素能降低H2O2刺激后的内皮细胞PAI-1的分泌,增加H2O2刺激后内皮细胞t-PA的分泌,从而提高H2O2刺激后内皮细胞t-PA/PAI-1相对比值,从而保护内皮细胞的纤溶功能。4.异鼠李素可以使受损内皮细胞分泌的vWf和TM减少,可知异鼠李素具有明显的内皮细胞保护作用,其保护作用可能与清除氧自由基,抗脂质过氧化,修复和保护细胞膜的完整性有关。
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