共轭亚油酸对前脂肪细胞3T3-L1的作用研究

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共轭亚油酸(Conjugated linoleic acid,CLA)是一组位置和几何异构体的十八碳共轭二烯酸的统称。其双键位于7,9;8,10;9,11;10,12;或11,13位置上,其中每个双键又有顺式和反式两种构型,即每个CLA的位置异构体有四种不同的几何异构体。因此CLA可形成多种同分异构体。天然的CLA主要存在于反刍动物的奶、肉的脂肪中。最主要的CLA异构体为c9,t11-CLA和t10,c12-CLA。牛瘤胃中c9,t11-CLA是厌氧溶纤维丁酸弧菌生物氢化亚油酸过程中的产物,此外还有一些细菌,如乳酸菌也可将亚油酸生物转化为CLA。CLA有多种生物活性,如抗癌、抗动脉粥样硬化,免疫调节和抗肥胖等。近年来,对CLA减肥活性的研究引起了广泛的注意。本研究中利用3种CLA,包括t10,c12-CLA,c9,t11-CLA,以及c9,t11-CLA和t9,t11-CLA的混合物,采用不同浓度(25,50,100,200μmol/L),不同作用时间(1d,2d,3d),研究了3种CLA对前脂肪细胞3T3-L1的作用。采用MTT法分析了CLA对前脂肪细胞3T3-L1增殖的抑制作用;结果表明,t10,c12-CLA和CLA混合物对3T3-L1细胞均有显著抑制增殖作用(P<0.05),前者作用大于后者。t10,c12-CLA的抑制作用在100μmol/L时抑制作用最强,并随处理时间增加而抑制效果增强;CLA混合物抑制作用随浓度增大、处理时间增加而增强。c9,t11-CLA对前脂肪细胞3T3-L1细胞增殖没有显著作用(P>0.05)。三种CLA在相同浓度,相同时间对3T3-L1增殖的抑制作用为:t10,c12-CLA最大,CLA混合物次之,随后是c9,t11-CLA。通过细胞形态观察、油红O染色,观察了t10,c12-CLA以及CLA混合物对前脂肪细胞3T3-L1分化的影响。实验分为50μmol/L t10,c12-CLA处理组、100μmol/L t10,c12-CLA处理组、100μmol/L CLA混合物处理组、对照组(未加CLA)。采用“鸡尾酒法”(DEX、IBMX、INSULIN混合诱导分化)分化3T3-L1细胞8天后,进行油红O染色比色,结果表明,t10,c12-CLA可以显著降低细胞内脂肪生成量(为对照组的64.9%,P<0.05),抑制前体脂肪细胞向成熟脂肪细胞分化,其中尤以100μmol/L t10,c12-CLA作用效果最为明显。采用半定量RT-PCR技术,分析了t10,c12-CLA对前脂肪细胞3T3-L1中PPARγ2 mRNA的表达水平的影响。实验中对50μmol/L t10,c12-CLA处理组、100μmol/L t10,c12-CLA处理组、对照组(未加CLA处理)对细胞PPARγ2 mRNA表达进行了分析。结果显示:用100μmol/L和50μmol/L t10,c12-CLA处理后的细胞,其PPARγ2的mRNA的表达量分别为对照组的52.1%,83.0%,这表明t10,c12-CLA抑制脂肪细胞的分化可能与其降低PPARγ2表达有关。
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