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利福霉素及其衍生物是治疗结核病、肺炎球菌引起的并发症的重要药物。地中海拟无枝菌酸菌U32作为利福霉素SV的生产菌株,对其次生代谢途径的鉴定有利于对产物进行定向改造,可以获得具有更高生物活性的衍生物,对其次生代谢途径的转录、翻译调控的研究可以有效地提高其产素能力。 利福霉素生物合成基因簇的转录及调控是影响抗生素产量的直接因素之一。本文通过RT-PCR实验对基因簇内相邻基因间的共转录进行鉴定,利福霉素合成基因簇分为14个转录单元,包括:AMED_0601、AMED_0602-0611、AMED_0612、rifS-rif、AMED_0615-rif、AMED_0635-0638、AMED_0639-rfbC、AMED_0641-0642、AMED_0643-0645、mhpA、AMED_0647-0649、AMED_0650-0652、AMED_0653和rifJ-AMED_0655。 本实验室研究发现,在U32培养时加入终浓度为0.8%的KNO3,可使利福霉素SV的产量提高171%,加入铵盐则导致利福霉素的产量下降。通过在不同外加氮源条件下培养U32并抽提总RNA进行RNA测序(RNA seq)实验,发现硝酸盐能够增强与铵盐转运、硝酸盐同化和利福霉素合成途径中的全部基因的转录;而铵盐则会阻遏这些基因的表达同时激活铵盐同化途径。此外,我们还发现铵盐会诱导一组硝酸盐转运蛋白ssuACB(AMED_0257,0258 and0259)的表达;该组转运蛋白的功能有待于进一步的研究。