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[目的]内质网氧化还原蛋白 1α（endoplasmic reticulum oxidoreductin 1α,ERO1α）与肿瘤的恶性进展密切相关,但ERO1α对结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响尚未完全明确。本研究通过慢病毒介导的shRNA敲减ERO1α的表达,并通过MTT、平板克隆形成实验和Western blot分别进行评估ERO1α对结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响,且通过Western blot对可能的分子机制进行探讨,最后通过构建裸鼠异种移植瘤模型评估ERO1α对体内肿瘤生长的影响。[方法]1.构建ERO1α敲减慢病毒（ERO1α shRNA）,感染ERO1α高表达的两株结直肠癌细胞系RKO和HT29,并设置敲减ERO1α的细胞株为shERO1α实验组和转染慢病毒空载体的细胞株为shNC阴性对照组,经嘌呤霉素筛选后建立稳定敲减ERO1α的结直肠癌细胞株,并用Western blot检测ERO1α的敲减效率。MTT和平板克隆形成实验检测敲减ERO1α的表达对结直肠癌细胞系RKO和HT29增殖能力的影响;Western blot检测敲减ERO1α的表达对细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax 和 cleaved-caspase 9 表达的影响。2.Western blot检测在结直肠癌细胞中敲减ERO1α的表达对PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达的影响。3.采用浓度为10μM的PI3K激动剂740Y-P分别处理shERO1α组的RKO和HT29细胞进行功能回复实验,即用MTT、平板克隆形成实验和Western blot分别进行检测结直肠癌细胞的增殖情况、凋亡相关蛋白和PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达情况。4.将稳定转染的shERO1α或shNC的HT29细胞株分别接种于BALB/c-nu裸鼠皮下,检测敲减ERO1α对结直肠癌细胞体内成瘤的影响,并用IHC和Western blot检测裸鼠移植瘤组织中ERO1α的表达。[结果]1.Western blot检测ERO1α蛋白的结果显示,构建的ERO1α shRNA显著降低结直肠癌细胞RKO和HT29细胞中ERO1α蛋白的表达（p均<0.0001）;MTT实验结果显示,shERO1α组RKO和HT29细胞的增殖速度在第3天和5天与shNC组相比均降低（p均<0.05）;平板克隆的实验结果显示,与shNC组RKO细胞（190.67±4.16个）和HT29细胞（131.00±3.61个）的集落形成数相比,shERO1α组RKO细胞（110.00±4.58个）和HT29细胞（79.33±2.08个）的集落形成数减少（p均<0.0001）;Western blot检测细胞凋亡相关蛋白的结果显示,与shNC组相比,shERO1α组RKO和HT29细胞中Bcl-2蛋白的相对表达量降低（p均<0.05）,而Bax和cleaved-caspase 9蛋白的相对表达量增加（p均<0.05）。2.Western blot结果显示,与shNC组相比,shERO1α组RKO和HT29细胞中p-PI3K、p-AKT蛋白的相对表达量降低（P均<0.05）,而PI3K和AKT蛋白的相对表达量无明显差异（p均>0.05）。3.Western blot结果显示加入PI3K激动剂740Y-P后,与shERO1α组相比,shERO1 α+740Y-P组RKO和HT29细胞中p-PI3K、p-AKT蛋白的相对表达量增加（P均<0.05）,而PI3K和AKT蛋白的相对表达量无明显差异（p均>0.05）;MTT实验结果显示加入740Y-P后,shERO1 α+740Y-P组RKO和HT29细胞的增殖速度在第3天和5天与shERO1α组相比均增加（p均<0.05）;平板克隆的实验结果显示加入740Y-P后,与shERO1α组RKO细胞（67.33±4.04个）和HT29细胞（56.00±18.00个）的集落形成数相比,shERO1α+740Y-P组RKO细胞（109.33±5.56个）和HT29细胞（110.00±12.00个）的集落形成数增加（p均<0.05）;Western blot检测细胞凋亡相关蛋白的结果显示加入740Y-P后,与shERO1α组相比,shERO1α+740Y-P组RKO和HT29细胞中Bcl-2蛋白的相对表达量增加（p均<0.05）,而Bax和cleaved-caspase 9蛋白的相对表达量降低（p均<0.01）。4.裸鼠皮下成瘤实验结果显示,与shNC组相比,shERO1α组裸鼠移植瘤的生长速度减慢,组间有显著性差异（p<0.05）;移植瘤称重结果显示,shNC组皮下移植瘤重量为0.4±0.19g,shERO1α组为0.16±0.09g,shERO1α组皮下移植瘤重量低于shNC组（P<0.05）;经IHC和Western blot验证,与shNC组相比,shERO1α组裸鼠移植瘤组织中的ERO1α蛋白的相对表达量降低（p<0.001）。[结论]1.敲减ERO1α的表达抑制结直肠癌细胞的增殖能力,促进结直肠细胞凋亡。2.敲减ERO1α的表达抑制结直肠癌细胞的裸鼠皮下成瘤能力3.ERO1α可能通过调控PI3K/AKT信号通路促进结直肠癌细胞的增殖和抑制结直肠细胞的凋亡。