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目的本研究以CD1-ICR小鼠炎症相关性结肠癌模型为基础,探讨生育三烯酚对结肠癌小鼠免疫细胞及多种细胞因子表达的影响。方法1.选用5周龄雄性CD1-ICR小鼠160只,按体重随机分为8组,分别是空白对照组(Control)、肿瘤模型对照组(AOM/DSS)、溶剂对照组(AOM/DSS+Solvent)、化疗药干预组(AOM/DSS+OXA)、生育三烯酚低剂量组(AOM/DSS+T3-L)、生育三烯酚中剂量组(AOM/DSS+T3-M)、生育三烯酚高剂量组(AOM/DSS+T3-H)和联合干预组(AOM/DSS+OXA+T3-H),每组20只,饲养于SPF级实验动物房内。实验开始后,空白对照组不作处理,结肠癌造模组依照炎症相关性结肠癌方法进行造模。溶剂对照组每天经口给予0.1mg/kg·bw溶剂。生育三烯酚组每天分别经口给予50mg/kg·bw、75mg/kg·bw和100 mg/kg·bw受试物。化疗药对照组每天经口给予0.1mg/kg·bw溶剂,自14周起,连续5天腹腔注射3mg/kg·bw奥沙利铂溶液,停用9天,连续三个周期。联合干预组每天经口给予100mg/kg·bw受试物,自14周起,连续5天腹腔注射3mg/kg·bw奥沙利铂溶液,停用9天,连续三个周期。实验连续进行20周。2.每天观察各组小鼠一般状态和便血等症状,每周称量小鼠体重。实验结束当天称量小鼠空腹体重,摘取脾脏及结肠,称重并计算脏器系数,记录结肠生成肿瘤小鼠数量;观察脾脏及结肠组织病理学改变。3.使用流式细胞仪检测各组小鼠外周血中T淋巴细胞亚群变化和IL-6、IL-10、TNF-a的含量;液相芯片技术检测小鼠外周血IL-4、IP-10、MIP-1β、G-CSF的表达水平;采用ELISA和免疫组化法分析结肠组织My D88和NF-kB的含量及表达。结果1.实验期间,各组小鼠体重均呈增长状态,组间比较差异无统计学意义(P(29)0.05)。模型对照组和溶剂对照组生存率明显低于空白对照组(P(27)0.05)。自第六周起,结肠癌造模组可观察到肉眼可见便血现象,空白对照组未见有小鼠便血;模型对照组与溶剂对照组第六周、第九周及第二十周便血率相比无差异(P>0.05);第九周生育三烯酚组和联合干预组便血率均低于溶剂对照组和化疗药对照组(P(27)0.05);第二十周化疗药对照组、联合干预组便血率低于溶剂对照组(P(27)0.05);与化疗药对照组相比,生育三烯酚低、中剂量组第二十周便血率增高(P(27)0.05)。肉眼观察小鼠结肠组织发现模型对照组和溶剂对照组生成肿瘤率是100%,各干预组肿瘤形成小鼠数量降低,其中生育三烯酚高剂量组和联合干预组肿瘤形成率低于溶剂对照组(P(27)0.05)。2.观察脾脏和结肠组织形态学改变,可见模型对照组脾小结数量减少,结肠组织有腺瘤样结构,伴有细胞大小形态不一,细胞极向消失,核染色加深等异型性现象,多累及粘膜和粘膜下层;化疗药对照组、生育三烯酚组和联合干预组脾小结数量、结构及结肠腺瘤细胞异型性现象趋于改善。3.与空白对照组相比,模型对照组和溶剂对照组CD4+和CD8+T淋巴细胞百分比均降低(P(27)0.05),溶剂对照组CD4+/CD8+增高(P<0.05);与模型对照组相比,溶剂对照组CD4+和CD8+T淋巴细胞百分比无差异(P(29)0.05),CD4+/CD8+增加(P<0.05);与溶剂对照组相比,生育三烯酚中、高剂量组CD4+T淋巴细胞增高(P(27)0.05),化疗药对照组、生育三烯酚中、高剂量和联合干预组CD8+T淋巴细胞百分比升高(P(27)0.05),化疗药对照组和联合干预组CD4+/CD8+降低(P<0.05)。与化疗药对照组相比,生育三烯酚和联合干预组CD4+T淋巴细胞百分比无差异(P(29)0.05),生育三烯酚低、高剂量组CD8+T淋巴细胞百分比降低(P<0.05),CD4+/CD8+增高(P<0.05)。4.与空白对照组IL-6含量相比,模型对照组和溶剂对照组增加(P(27)0.05);模型对照组与溶剂对照组之间无差异(P(29)0.05);与溶剂对照组相比,化疗药对照组、生育三烯酚中、高剂量和联合干预组IL-6含量均降低(P(27)0.05);生育三烯酚低剂量组IL-6含量高于化疗药对照组(P(27)0.05)。与空白对照组TNF-α含量相比,模型对照组和溶剂对照组增加(P(27)0.05);模型对照组与溶剂对照组之间无差异(P(29)0.05);与溶剂对照组相比,生育三烯酚高剂量组和化疗药对照组TNF-α含量降低(P(27)0.05);与化疗药对照组比较,生育三烯酚组和联合干预组TNF-α含量无差异(P(29)0.05)。与空白对照组IL-10含量相比,模型对照组降低(P(27)0.05);模型对照组与溶剂对照组之间无差异(P(29)0.05);化疗药对照组、生育三烯酚组和联合干预组IL-10含量与溶剂对照组相比,差异无统计学意义(P(29)0.05);与化疗药对照组相比,生育三烯酚中剂量组IL-10含量增高(P(27)0.05)。5.与空白对照组相比,模型对照组和溶剂对照组IL-4含量降低(P(27)0.05,模型对照组与溶剂对照组之间无差异(P(29)0.05);与溶剂对照组和化疗药对照组相比,联合干预组IL-4含量均增高(P(27)0.05)。与空白对照组IP-10含量相比,模型对照组和溶剂对照组都增加(P(27)0.05),模型对照组与溶剂对照组相比,差异无统计学意义(P(29)0.05);与溶剂对照组和化疗药对照组相比,生育三烯酚组和联合干预组IP-10表达水平都降低,但差异无统计学意义(P(29)0.05)。与空白对照组MIP-1β相比,模型对照组含量升高(P(27)0.05),模型对照组与溶剂对照组之间无显著差异(P(29)0.05);与溶剂对照组相比,生育三烯酚高剂量组和联合干预组MIP-1β含量均降低(P(27)0.05);与化疗药对照组相比,生育三烯酚组和联合干预组MIP-1β含量无差异(P(29)0.05)。与空白对照组G-CSF含量相比,模型对照组和溶剂对照组升高(P(27)0.05),模型对照组与溶剂对照组组之间无差异(P(29)0.05);与溶剂对照组相比,化疗药对照组G-CSF含量明显降低(P(27)0.05),生育三烯酚中、高剂量组和联合干预组也降低(P(27)0.05);与化疗药对照组相比,生育三烯酚组和联合干预组G-CSF含量均无差异(P(29)0.05)。6.在结肠癌造模组结肠组织中My D88、NF-kB蛋白均有不同程度的表达,模型对照组和溶剂对照组My D88、NF-kB含量及表达均高于空白对照组(P<0.05);模型对照组与溶剂对照组之间无差异(P(29)0.05);与溶剂对照组相比,化疗药对照组My D88含量及表达均降低(P<0.05),联合干预组My D88含量降低(P<0.05);与溶剂对照组NF-kB含量及表达相比,化疗药对照组、生育三烯酚中、高剂量组和联合干预组NF-kB含量及表达均降低(P<0.05);与化疗药对照组相比,生育三烯酚低剂量组NF-kB表达升高(P<0.05),生育三烯酚组My D88含量均升高(P<0.05),My D88表达无变化(P(29)0.05)。结论1.生育三烯酚可明显改善AOM/DSS诱导炎症相关性结肠癌小鼠的便血及肿瘤形成情况,提高生存率;2.生育三烯酚可在不同程度上改善AOM/DSS诱导炎症相关性结肠癌小鼠免疫细胞和细胞因子的功能紊乱现象;3.生育三烯酚能抑制AOM/DSS诱导炎症相关性结肠癌小鼠结肠组织My D88和NF-κB的表达,提示生育三烯酚可能从TLR/My D88/NF-kB信号转导方面发挥其免疫调节作用。