据统计资料分析，口腔颌面部恶性肿瘤占全身恶性肿瘤的8.2％，而舌部是口腔癌的高发部位。肿瘤的发生发展是多因素、多阶段与多基因作用的结果，口腔颌面肿瘤的致病因素与发病条件至今被认为是一个较复杂的问题。目前对其病因的认识，大多接受“癌瘤病因综合作用”的概念，其中外来因素包括紫外线、吸烟、人乳头瘤病素等物理、化学及生物因素，而机体内在的导致鳞癌的因素也有很多，包括免疫、精神、遗传、内分泌因素等。近年来，口腔癌的发病率有逐年增高的趋势，且女性罹患舌癌者有明显增加的趋势，年龄亦趋向年轻化，女性舌癌患者的预后相对比男性也差。女性患者增多的原因并不十分清楚，但提示内分泌因素可能对肿瘤的发生发展有一定的影响。 众所周知，激素和激素样物质是控制细胞分化和增殖的重要因素。有资料表明，雌激素受体(estrogen receptor,ER)不仅存在于乳腺、子宫等各器官靶细胞中，在许多非靶器官组织如肝、肾、结肠、胰、口腔粘膜甚至 第口军匡大学顷士 文 皮肤都能测出多少不一的雌激素受体存在，而且雌激素受体在肿瘤组织中 的存在也逐渐引起人们的重视。人们利用免疫组化方法和聚合酶链式反应 （pol仰e仙e chmn reaction，PCR）方法发现在生殖系统肿瘤、胃癌、结肠 直肠癌、胰腺癌、食管鳞癌、肺鳞癌、上颌窦鳞癌、黑色素瘤及皮肤肿瘤 等组织中有不同程度的雌激素受体存在。雌激素受体在肿瘤中的分布提示 雌激素可能通过其受体对许多肿瘤的产生、发展和生长增殖进行调控。有 资料表明，雌激素可明显增强皮肤鳞状细胞癌和基底细胞癌的发展，促进 前列腺癌的细胞代谢，对食管鳞癌、肺鳞癌、上颌窦鳞癌等肿瘤的内分泌 治疗可能有疗效。但在人舌鳞状细胞癌中是否有雌激素受体的表达及雌激 素对人舌鳞癌细胞的增殖代谢的调控尚未见报道，对此调控作用的进一步 深入研究将有助于了解人舌鳞癌的发生和发展机制。 本实验应用免疫细胞化学染色及反转录－聚合酶链式反应（reverse transcnptlon－pol帅eme chain reaction，RTPCR）的方法研究了雌激素受体在 人舌鳞癌细胞上的表达，采用 MTT和3H．TdR掺入法及流式细胞仪检测法 观察了 p－雌二醇（6七stradiol，6I＊对人舌鳞癌细胞增殖代谢及分化的调 控，用共聚焦显微镜检测细胞【＊勺；，观察了卜雌二醇对细胞【＊ 勺．的影响。 结果表明： 1．免疫细胞化学方法显示在人舌鳞癌细胞中存在雌激素受体免疫阳性物 质，其中表达雌激素受体a＊ alpha，ERa）的阳性细胞数较多， 染色较强，其免疫阳性物质主要存在于细胞的胞核中，而表达雌激素受 体p＊strogen beta，ERm阳性细胞数较少，染色相对较弱，其免疫阳 性物质有的分布于胞浆中，有的则分布于胞核中。 2．RTPCR的方法同样证明了在人舌鳞癌细胞中有人ER 1lltuVA的表达， 包括ER心 InRNA和ER乃 InRNA，与组化结果类似。以上实验结果表 明在人舌鳞癌细胞上有ER的存在，提示雌激素有可能通过ER起作用， 影响着人舌鳞癌细胞的增殖与代谢。 3．My和3H1dR掺入实验结果表明，p七。能促进人舌鳞癌细胞的增殖和 DNA合成，其促进作用与pE的作用浓度有关，随作用浓度增加，促 进作用增强，呈现明显的剂量依赖效应（P＜0刀1）。此促进作用可被雌 激素受体阻断剂Tmoxifen（他莫西芬）阻断。表明雌激素可以通过ER 2 窜曰旱巴大学召士学 文 对人舌鳞癌细胞的增殖与代谢起促进作用。 4．流式细胞仪检测细胞周期的结果表明，人舌鳞癌细胞在 10“mo凡 p－E。 的条件下培养24h后，GI期的细胞比例从对照组的（7．5土2．55）％下 降为（62．3土3．1）O；S期和GZ期的细胞比例从对照组的（23．5土3．52） ％上升为门7．7土4．17）％。表明106moffe卜E。能增加人舌鳞癌细胞进 入S期和GZ期的细胞比例，而使处于＊期的细胞比例下降（尸＜0．of）。 而 p－E。门七mol几）加入 Tamoxifen门“moffe）的条件下培养 24h后 的细胞比例与对照组相比无明显差异（P＞0刀5）。说明雌激素可通过ER 使人舌鳞癌细胞的DNA合成增加，促进其细胞的增殖。 5．用激光扫描共聚焦显微镜方法显示，加入p－EZ门－‘mOI几）后，人舌鳞 癌细胞的荧光强度与对照相比相对增强，表明人舌鳞癌细胞厂ah］；的相 对水平增高。 对激素?