利用改良滴冻法超低温保存部分柿属种质的研究

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柿属植物种质资源丰富,但传统的田间种植保存,需要消耗大量人力、物力和财力,且易受病虫害、自然灾害等困扰。因此,建立与其配套的离体保存技术体系显得更为重要。超低温保存是目前植物种质资源长期稳定保存的理想方法之一,本试验对部分柿属植物进行了改良滴冻法超低温保存研究。主要研究结果如下:(1)比较了TDZ、ZT、CPPU三种细胞分裂素诱导芽分化的效果,发现TDZ的效果最好,大大缩短培养周期,利用TDZ对君迁子(Diospyros lotus L.Date plum)、磨盘柿(D.kaki Thunb.‘Mopanshi’)、鄂柿1号(D.kaki Thunb.‘Eshi 1’)、禅寺丸(D.kaki Thunb.‘Zenjimaru’)、前川次郎(D.kaki Thunb.‘Maegawa-jirou’)5种柿基因型的休眠芽诱导,2周后分化率可达到60.00%。(2)对美洲柿(D.virginiana L.common persimmon)、鄂柿1号(D.kaki Thunb.)、阳丰(D.kaki Thunb.‘Youhou’)三种不同基因型柿试管苗茎尖进行超低温保存方法的比较,结果发现玻璃化法、滴冻法、改良滴冻法的茎尖成活率分别为33.33%、37.78%、57.78%。(3)建立了部分柿属植物君迁子(D.lotus L.)、美洲柿(D.virginiana L.)和柿(D.kaki Thunb.)的6个基因型试管苗改良滴冻法保存体系:试管苗在白天25±1℃、晚上4±1℃,光照时间12h/d,弱光8001x的培养条件下进行6周的交替低温锻炼后,切取试管苗茎尖在含蔗糖0.5mol/L的培养基上预培养5d,20℃下装载液过渡10min,0℃下PVS2处理1.5h后液氮保存,40℃水浴快速化冻、洗涤后恢复培养,成活率超过60.00%。(4)分别对君迁子、磨盘柿、鄂柿1号、禅寺丸、前川次郎5种基因型柿休眠芽茎尖进行了改良滴冻法超低温保存研究:茎尖在含蔗糖0.5mol/L的培养基上预培养2d,然后在20℃下装载液过渡10min,0℃下PVS2处理1.5h后液氮保存,40℃水浴快速化冻、洗涤后恢复培养,再生率达到66.67%。
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