雏鸡呼吸道黏膜屏障免疫损伤研究

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呼吸道黏膜屏障的免疫应激损伤是引发家禽多病因呼吸道病的关键因素,但目前对于该病理损伤发生的机制尚缺乏系统研究。本论文以雏鸡为实验动物,从呼吸道黏膜纤毛摆动活性、亚细胞结构的变化等方面对此进行了初步探讨。论文分为4部分。  1.气管黏膜纤毛摆动活力的检测及其随日龄的变化  以20日龄鸡、鸭和20胚龄鸡胚气管为实验对象,研究对比了墨水示踪法、墨粉示踪法与红细胞示踪法测定气管纤毛摆动活性数据。结果显示,红细胞具有最好的示踪效果。不同日龄鸡气管纤毛摆动活性的红细胞示踪法测定结果表明,气管纤毛摆动活性随着日龄的增长而显著提高。  2.气管黏膜扫描电镜观察及其显微结构的日龄变化  通过冷冻干燥法和临界点干燥法制备扫描电镜样品,放大3000倍可清晰观察到气管纤毛的形态结构。20日龄鸡气管纤毛平均长度为4.55±0.53μm,直径0.16±0.04μm,每个纤毛细胞具有131±30根纤毛。1日龄气管表面覆盖着刚萌发的纤毛,成熟纤毛较少,说明雏鸡气管黏膜纤毛的发育尚未完善,这与气管纤毛摆动活性的检测结果基本一致。  3.聚肌胞苷酸(polyI:C,PIC)限制病毒繁殖的研究  以鸡胚为实验对象,研究了干扰素诱导剂PIC对新城疫病毒Lasota株在鸡胚内繁殖的影响。结果表明,鸡胚攻毒量介于10-5-10-1羽份/mL时,鸡胚尿囊液中病毒滴度均可达到9log2以上,攻毒剂量低于10-8羽份/mL时,尿囊液中检测不到病毒滴度。0.4 mg/胚剂量的PIC能完全抑制浓度为5×10-6羽份/mL即7.5×107(PFU/mL)的病毒在鸡胚内的增殖,并表现出一定的剂量效应。  4.不同疫苗免疫对呼吸道黏膜的损伤研究  海赛克斯蛋公雏饲养至8日龄,随机分组后,两组提前口服PIC作为给药实验组,各实验组分别点眼滴鼻接种新城疫Lasota毒株以及新城疫-传支二联弱毒苗,观察雏鸡气管纤毛摆动活性、纤毛结构、抗体水平等指标。  结果显示,空白组血清IgG、IgA以及胆汁SIgA含量维持在较低水平并有所下降,接种NDV疫苗的鸡血清IgG含量逐渐上升5日后达到最大值972±17μg/mL后逐渐降低, SIgA含量于接种后仍然不断降低,但是较空白对照组略高;接种NDV/IBV二联疫苗的鸡血清IgG含量较单独使用NDV疫苗组上升快,7日时血清IgA含量迅速上升到最大值631±62μg/mL后逐渐下降,提前口服PIC组SIgA含量迅速上升后逐渐下降,可见PIC对胆汁IgG和SIgA的产生都有明显的促进作用,对弱毒苗的免疫不存在负面影响。  免疫疫苗组鸡气管黏膜的黏液纤毛摆动活性明显低于空白对照,提前使用PIC后免疫接种的实验组鸡气管黏液纤毛摆动活力较空白对照组也出现了不同程度的下降,但下降幅度较单独免疫弱毒苗的实验组小。表明PIC可以缓解弱毒苗对气管纤毛摆动活性的影响。  扫描电镜观察结果显示,提前给鸡口服PIC后免疫接种病毒疫苗的鸡气管黏膜只出现了轻微的纤毛黏连和黏液增多,直接接种疫苗的鸡气管黏膜分别出现了纤毛丛黏连、纤毛弯曲、倒伏、黏液增多直至纤毛脱落等不同程度的病变。结果提示,PIC减轻了弱毒苗在气管黏膜繁殖时的纤毛损伤。  高效液相色谱(HPLC)法检测鸡肝脏中视黄酸含量的变化,并分析其与呼吸道气管黏膜损伤情况之间的关系。结果表明,空白组肝脏视黄酸水平基本稳定在4.01±0.43μg/mL-4.21±0.22μg/mL,NDV与NDV/IBV免疫5日后,肝脏视黄酸水平迅速下降至0.97±0.16μg/mL和0.80±0.14μg/mL,之后缓慢上升。PIC实验组肝脏视黄酸水平下降幅度较小,回升较快。肝脏视黄酸水平与SIgA含量以及呼吸道黏膜形态的变化存在一定的相关性。
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