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河套蜜瓜(Cucumis melo L. cv Hetao)是内蒙古河套地区优良的地方品种,目前对河套蜜瓜保鲜的研究主要集中在保鲜剂的筛选方面,以交变磁场作为河套蜜瓜的保鲜方法未见报道。此外,磷脂酶D(phospholipase D,PLD)在果蔬保鲜过程中具有重要作用,通过对PLD的调控,可以延长河套蜜瓜的保鲜时间。 本论文以河套蜜瓜为实验材料,采用 RT-PCR技术克隆得到了河套蜜瓜 PLD cDNA全长。然后采用生物信息学方法对其序列结构和氨基酸序列进行了分析,对其二级结构和三级结构进行了预测,并且进行了氨基酸序列的多重比对和系统树的建立。另外,还对不同的时间磁场处理下河套蜜瓜 PLD基因的表达量以及一些生理指标进行了测定,主要包括 PLD活性、呼吸强度、还原糖含量、可溶性蛋白含量、失重率、可溶性固形物含量、维生素C含量和电导率。主要结论如下: (1)采用RT-PCR方法克隆得到了河套蜜瓜PLD全长,其中包含开放阅读框2424 bp,编码了807氨基酸,分子量大小为92.13297 kDa,等电点为6.48。 (2)预测河套蜜瓜 PLD氨基酸序列结构表明,其二级结构主要为无规则卷曲(37.55%),α-螺旋(26.64%),伸展链(23.67%),β-转角(12.14%); (3)河套蜜瓜 PLD氨基酸序列结构特点显示,一个 C2结构域、两个H×K××××D基序和一个IYIENQFF基序。两个H×K××××D基序之间相隔320个氨基酸。预测出的三级结构包含两个H×K××××D基序和一个IYIENQFF基序。 (4)系统进化树和氨基酸多重比对结果均显示河套蜜瓜与甜瓜同源性最高,达99%。 (5)不同的磁场处理时间下河套蜜瓜PLD表达量均低于对照组,且处理5 min PLD表达量最低。 (6)测定了不同的磁场处理时间下河套蜜瓜的 PLD活性、呼吸强度、还原糖含量、可溶性蛋白含量、失重率、可溶性固形物含量、维生素 C含量和电导率,结果显示数据呈现波动性变化,说明磁场处理对河套蜜瓜生理特性具有一定的影响。 本研究为进一步深入讨论磁场处理对河套蜜瓜保鲜效果的机制奠定了基础。