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背景与目的:ARDS是以严重呼吸窘迫,进行性呼吸衰竭为主要表现的临床急、危重症[1]。其病理特征为肺泡上皮屏障和肺毛细血管内皮屏障的弥漫性损害,导致蛋白质渗漏、肺水肿、炎性细胞因子浸润及透明膜形成等[1、6]。直接或间接的肺损伤均引起炎症细胞的活化及炎症介质的大量释放,继而触发炎症级联反应,导致全身炎症失控[4]。临床上ARDS患者即使有相似的发病因素、治疗方案,其发展为ARDS的概率,炎症程度,进展情况及预后也存在差异。因此深入研究与ARDS的炎症发生密切相关的基因将对ARDS的防治提供新的方向。SIRT1是Ⅲ类组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC),近来研究证实,SIRT1可通过对NF-κB、FOXO3、p53等组蛋白和非组蛋白的脱乙酰基作用,启动炎症的发生发展[7、11]。但SIRT1对炎症的作用是双向的,SIRT1可以抑制炎症因子的活化,持续增高的水平又会出现免疫抑制并造成死亡率增加,SIRT1对炎症的作用可因环境的不同而不同[15-17]。疾病阶段、作用靶点的差异等,SIRT1对机体的炎症调控及疾病转归可能都存在差异。而SIRT1对ARDS的炎症反应究竟有着何种作用尚不清楚,而p38 MAPK信号通路作为ARDS的主要炎症调控途径,因此推测p38 MAPK信号通路可能参与SIRT1对ARDS的炎症作用。因此本课题拟运用SIRT1+/-基因敲减小鼠和野生型小鼠,在不同SIRT1基因背景下,用LPS建立ARDS模型,评估SIRT1基因减弱对肺损伤炎症程度的影响,以及观察肺组织中p38 MAPK通路信号分子表达的变化,从而初步探讨SIRT1对LPS致ARDS炎症发生发展的具体作用及其可能机制。方法:1.本研究采用SIRT1+/-基因敲减小鼠作为实验动物,进行大量配对繁殖,用PCR法进行基因型鉴定,筛选出足够数量的SIRT1+/-小鼠,用于后续实验研究。2.运用SIRT1+/-基因敲减和野生型小鼠,使用q RT-PCR和Western Blot检测两种小鼠肺组织中SIRT1表达的差异。3.用LPS腹腔注射法建立ARDS模型,观察两种不同SIRT1基因背景小鼠的肺组织病理形态学变化,测定肺湿干比(W/D比),进行支气管肺泡灌洗液(BALF)的白细胞计数,BCA法测定BALF中总蛋白浓度,ELISA法检测BALF及血浆中炎症因子TNF-ɑ、IL-6水平,Western Blot及免疫组化法检测两种小鼠肺组织中p-p38MAPK、p-ATF2的表达变化。结果:1.SIRT1+/-基因敲减杂合子小鼠(HET)与野生型小鼠(WT)相比,其肺组织SIRT1在m RNA和蛋白表达均显著降低(P<0.01)。2.HET+LPS组与WT+LPS组分别与各自生理盐水对照组相比,病理形态学观察均表现为肺组织的明显损伤,肺损伤病理评分显著增高(P<0.05),而HET+LPS组中肺组织结构的破坏更严重,肺损伤病理评分进一步增加(P<0.05);HET+LPS组与WT+LPS组相比于对照组,肺W/D比,BALF中白细胞总数、总蛋白浓度,BALF及血浆中炎症因子TNF-ɑ、IL-6水平均显著增加(P<0.05),而HET+LPS组与WT+LPS组相比,上述指标的增加更为显著(P<0.05)。3.HET+LPS组与WT+LPS组分别和各自对照组相比,肺组织中p-p38MAPK、p-ATF2的表达增加(P<0.05),而HET+LPS组与WT+LPS组相比,上述蛋白的增加更明显(P<0.05)。结论:1.SIRT1+/-小鼠肺组织中的SIRT1表达显著降低,SIRT1表达的差异为后续实验提供了必要的前提和有效的保障。2.LPS致ARDS的疾病模型中,SIRT1+/-小鼠与野生型小鼠相比,表现为更严重的炎症反应,提示SIRT1敲减对LPS致ARDS小鼠有着促炎作用,SIRT1在LPS致ARDS的炎症反应过程中起着保护作用。3.LPS致ARDS的疾病模型中,SIRT1+/-小鼠肺组织中p-p38MAPK、p-ATF2的表达与野生型小鼠相比明显增加,提示p38 MAPK-p-ATF2信号通路可能参与了SIRT1对LPS致ARDS的炎症调控作用。