红树莓组培快繁体系与试管苗褐化控制技术研究

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本文通过对红树莓哈瑞太兹(Heritage)筛选不同外植体,研究不同植物生长调节剂对红树莓芽诱导、继代增殖和生根诱导的影响,得出最佳培养基配方,最后成功的驯化移栽,建立红树莓组培快繁体系。同时进行红树莓试管苗褐化控制技术的研究,试图找到控制红树莓组织培养各个阶段褐化的有效措施。主要试验结果如下:1.红树莓组培快繁体系的建立通过对外植体采集时间、芽类型和灭菌时间进行完全随机试验。试验得出非裸芽为最佳的外植体,而最适合非裸芽的灭菌时间为8mmin。在初代芽诱导培养基试验中通过6-BA、NAA和GA3进行正交试验,得出最适合红树莓芽诱导的培养基为MS+6-BA1.Omg/L+NAAO.lmg/Lo在芽诱导中6-BA为主导因素。在继代增殖培养时通过6-BA、NAA和TDZ的正交试验,得出最适合红树莓试管苗继代增殖的培养基为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+TDZ0.5mg/L,起主导作用的仍为6-BA,与试验结果一致。生根培养中通过对基本培养基类型、是否活性炭和IBA质量浓度进行研究,得出最适合红树莓试管苗生根的培养基为1/2MS+活性炭0.5 g/L+IBA0.2mg/L。本试验通过对驯化天数的研究,表明移栽前的驯化对红树莓试管苗至关重要,极大的提高了移栽成活率。最佳驯化时间为3-5d,移栽成活率达到93%。2.红树莓试管苗褐化控制技术的研究通过研究不同外植体和灭菌方法对红树莓褐化的影响。试验结果显示,分段式灭菌具有明显优势,而非裸芽的褐化率低于裸芽和顶芽。因此,进行红树莓组织培养的最佳外植体为非裸芽,灭菌时间为4min+3min。暗培养对褐化的影响不显著,可以降低褐化程度,同时暗培养会导致红树莓芽诱导的时间变长。在继代增殖中,本试验通过在培养基中添加不同浓度的活性炭、EDTA、柠檬酸和Na2S2O3,得出活性炭和柠檬酸对控制红树莓试管苗褐化有积极作用。随着活性炭含量的增加,褐化程度在不断降低,但是增殖倍数也在不断降低,认为在控制红树莓褐化时,添加活性炭含量不宜超过2g/L。柠檬酸质量浓度为6g/L时,褐化率达到最低,增殖倍数为7.17。添加EDTA不仅不会减轻褐化,反而增加了褐化率和褐化程度。添加Na2S2O3虽然会降低褐化率,但会加重褐化程度,使严重褐化的比例大幅增加。当培养基中的Mg、Fe含量为MS的1/2时,植株叶片会变黄,当Mg、Fe含量提升为MS的2倍时,植株浓绿,无发黄现象。但Mg、Fe加倍后会使褐化率升高为79.78%,但与对照(MS)无显著差异。说明Mg、Fe元素可以缓减红树莓试管苗变黄。生根培养中,本试验研究了活性炭对试管苗生根阶段褐化的影响,活性炭浓度为1.0g/L时生根率较高,平均每株生根数较高,植株生根快且生根整齐。
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