海兰鸡MSTN基因的表达检测及其ASODN对成肌细胞作用效果的研究

来源 :沈阳农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:alanlee75
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在本论文中,作者确定了海兰鸡MSTN基因的表达规律及反义寡核苷酸(antisenseoligonucleotide,ASODN)对该基因表达的抑制作用,并进一步探讨了MSTN基因的作用机理。主要研究内容如下: 1.对Genebank中不同动物MSTN基因序列进行分析,确定其保守区。利用PrimerPremier5.0软件自行设计了一对引物,以胚胎(E)9、13、17和21日龄及出生后(D)7和14日龄海兰鸡的胸肌、腿肌及心肌作为实验材料,进行RT-PCR扩增,扩增产物为397bp的保守区cDNA片段,结果表明:在所选的三种组织中,MSTN基因均有表达,并且胚胎17日龄腿肌表达水平最高;各日龄海兰鸡腿肌中MSTN基因表达水平均高于相同日龄的胸肌和心肌中该基因的表达水平。 2.利用RNAstructure3.7软件预测了MSTN基因mRNA的二级结构,并用其中的步移法(oligowalkmodule),自行设计了ASODN序列,序列为:5′-GCTTGTTCCAGGCGCAGT-3′,全硫代修饰。用脂质体介导ASODN片段,转染到体外培养的胚胎11日龄海兰鸡腿肌成肌细胞内,检测MSTN基因的表达量及对成肌细胞的作用效果。结果表明:该ASODN片段可以明显抑制成肌细胞中MSTN基因的表达,促进成肌细胞增殖与分化,且2.0μmol/L为最佳抑制浓度。
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