甲状腺机能亢进症是一种常见的代谢紊乱性疾病,在成年女性发病率略高于男性。甲亢性心脏病是甲状腺功能亢进的严重并发症之一,是甲亢患者死亡的重要原因之一,直接危及患者的健康和生命。我们课题组在前期关于在甲亢性心脏病条件下心磷脂对甲亢性心脏病的相关研究中发现:甲状腺功能亢进可显著影响心磷脂的表达。我们前期相关实验还通过采用心磷脂酰基转移酶(ALCAT1)敲除小鼠建立甲亢模型,研究发现:甲亢条件下心磷脂含量的增加并不仅仅是甲状腺激素作用下的一个伴随性结果,心磷脂在表达增加的同时,还参与了甲亢性心脏功能的病理变化过程。据文献报道,HDAC9直接调控心脏的生长[1],在维持心脏正常功能方面具有十分重要的作用。据文献报道,HDAC6与心脏的心率失常密切相关[2]。甲状腺激素含量过高导致的甲亢性心脏病的主要特征包括心律失常和心肌肥大,这可能与HDAC6和HDAC9密切相关,因此我们探讨心磷脂对甲亢性心脏病HDAC6和HDAC9表达所起到的作用。本实验从动物模型水平(KM小鼠心脏组织)和离体细胞水平(H9C2心肌细胞系)分别研究甲状腺激素对HDAC6和HDAC9的影响,以及不同饱和度心磷脂及心磷脂抑制剂对HDAC6和HDAC9的影响。并在此基础上通过H9c2细胞来探讨,心磷脂在甲状腺激素作用下对HDAC6和HDAC9表达所起到的作用。(1)HDAC9结果,结果显示:KM小鼠腹腔注射T4实验心肌细胞中HDAC9蛋白表达量和基因表达量均增加。在离体实验中,给大鼠心肌细胞加入甲状腺激素以后,从给药1小时开始到给药48小时通过蛋白质印迹技术可以看到,在12h以内HHDAC9的蛋白表达量均比空白对照组高,且蛋白表达量不断减少,在24小时以后HDAC9的蛋白表达量才明显低于空白对照组。我们的研究发现CL18:2,CL18:1和CL14:0能使H9C2细胞HDAC9蛋白表达量升高,随着给药时间的延长不同饱和度的心磷脂变化程度不同。CL14:0对心肌细胞中HDAC9蛋白的表达量随着给药时间的延长而不断降低,CL18:2,CL18:1对H9C2细胞中HDAC9蛋白的表达不随着时间的推移而变化,均比空白对照组表现出升高。我们的实验结果表明心磷脂的不饱和程度可能影响HDAC9蛋白的表达。在加入心磷脂抑制剂后,HDAC9的蛋白表达量显著减少,在加入T4也只能恢复到接近空白对照的水平。(2)HDAC6结果,实验结果表明:在甲亢性心脏病变小鼠中,心肌细胞中的HDAC6的蛋白表达量明显低于空白对照组,对其基因进行RT-PCR分析可以发现HDAC6的mRNA却明显高于空白对照组。在离体实验中,给大鼠心肌细胞加入甲状腺激素以后,从给药1小时开始到给药48小时通过蛋白质印迹技术可以看到,HDAC6的蛋白表达量都一致减少,在所有小时段均比空白对照低,与HDAC9不一样在各个时间段均表现为减少。在基因水平检测可以看到HDAC6的mRNA表达量明显升高与空白对照组相比。此外,CL18:2,CL18:1和CL14:0均能使H9C2细胞HDAC6蛋白表达量降低,但CL18:1降低HDAC6的幅度最大。同样的方法在给药12小时后,收细胞,提取蛋白,进行蛋白质印迹发现加入钌红后,HDAC6蛋白表达量明显降低,加入T4后明显升高但与空白对照组相比无明显差异。说明HDAC6很有可能是T4通过心磷脂来产生作用的。通过以上的实验表明,CL18:1对HDAC6影响的幅度最大。通过以上的试验可以看出T4和CL18:1密切相关,基本上保持同增同减。这表明T4很有可能是通过CL18:1来影响或者作用于HDAC6的。综合以上实验结果,关于HDAC9:(1)T4促进HDAC9的表达,且心磷脂在其中有重要的作用;(2)不同饱和度的心磷脂对HDAC9的促进作用程度不同,CL14:0的促进作用最显著;(3)加入心磷脂抑制剂后,HDAC9的表达明显下调,且加入T4后HDAC9表达上调,但只接近于空白对照组。关于HDAC6:(1)T4抑制HDAC6的表达,且心磷脂在其中有重要的作用;(2)不同饱和度的心磷脂对HDAC6的抑制作用程度不同,CL18:1的抑制作用最显著;(3)加入心磷脂抑制剂后,HDAC6的表达明显下调,且加入T4后HDAC9表达上调,但只接近于空白对照组。