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杨梅是我国南方特色果树,花青苷是杨梅成熟果实中红色色素的主要成分,花青苷是果实品质重要因子,提高果实花青苷含量既可改善果实色泽又能增强果实保健功能。在杨梅上,本研究小组先前分离鉴别了调控花青苷生物合成的MrMYB1,且在’水晶’等杨梅上发现了其等位基因MrMYB1d(对应于MrMYB1起始密码子后的第30位碱基缺失)。本实验主要以’水晶’、’东魁’和’荸荠’等杨梅为研究材料,以MrMYB1d为对象,进行杨梅MrMYSJ/MrMYB1d等位基因型分析,并进一步探索MrMYB1d对花青苷积累的调控效应。主要结果如下:1.应用传统基因克隆与测序分析,发现研究分析的十个杨梅品种在MYB基因上出现两种基因型。果实颜色为深色的紫黑色杨梅品种’荸荠’、’黑晶’、’乌梅’、’浮宫1号’、’特早梅’的基因型为纯合的MrMYB1;果实颜色较浅的白色、粉红色、红色的杨梅品种’水晶’、’福建龙海白杨梅’、’粉红’’白东魁’、’东魁’的基因型为杂合的MrMYB1/MrMYB1d。研究分析时未发现拥有纯合MrMYB1d基因型的杨梅。2.发明了一种用于检测MrMYB1等位基因的CAPS标记。通过PCR引物设计出SEQ ID NO.1与SEQ ID NO.2引物对,采取CTAB法提取不同杨梅品种基因组DNA,运行PCR,用Hha]内切酶酶切PCR产物,酶切后将产物进行琼脂糖凝胶电泳,最后根据琼脂糖凝胶电泳结果分析MrMYB1等位基因型,CAPS标记分析结果与测序基因型分析结果一致。3.构建了包含MrMYB1d的植物表达载体,就MrMYB1d基因对杨梅花青苷积累的效应进行了分析。在杨梅、烟草、桃、苹果植物上过表达MrMYB1d,呈现出有所差异的花青苷累积的表型。在WT、35S::MrbHLH1、35S::MrMYB1烟草植株上注射含有MrMYB1d的农杆菌混合液与对照注射不含MrMYB1d的烟草叶片相比有较少的色素沉着,且色差差异显著,Q-PCR结果显示过表达MrMYB1d之后,与花青苷合成相关的结构基因NtCHS、NtDFR NtUFGT、NtANS的表达下调。在’东魁’、’荸荠’杨梅果实上注射MrMYB1d的果实颜色比注射MrMYB1的颜色浅,花青苷含量较低;注射MrMYB1+MrbHLH1+MrMYB1d的果实比注射MrMYB1+MrbHLH1的果实颜色浅,色差差异显著,且具有较低的花青苷含量。在苹果和桃果实中过表达MrMYB1+MrbHLH1的注射部位迅速积累花青苷,导致显著的红色着色,而过表达MrMYB1+MrbHLH1+MrMYB1d影响了果实着色,注射部位只有较浅的着色。4.通过遗传转化,获得了 35S::MrMYB1-MrbHLH1+MrMYB1d转基因烟草3株,它们显示出一系列颜色表型,命名为Line1,Line2,Line3,与35S::MrMYB1-MrbHLH1烟草植株相比颜色较浅,CIRG值差异显著,花青苷含量较低,与花青苷合成相关的结构基因NtCHS、NtDFR、NtUFGT、NtANS表达量下调,进一步验证了MrMYB1d对花青苷的负调控效应。