【摘 要】
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目的:放射性直肠损伤是盆腔恶性肿瘤患者接受放射治疗的主要副作用之一。目前,关于放射性直肠损伤发生的机制尚不完全清楚。因此,本课题主要探讨照射后microRNA-122-5p（miR-122-5p）表达变化对放射性直肠损伤的影响机制。方法:收集直肠癌患者在放疗前与放疗后的外周血,并通过qRT-PCR技术检测血清中miR-122-5p的表达变化;进一步在C57BL/6小鼠放射性直肠损伤模型中验证miR
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（编号:81872547,81602663）； 上海市自然科学基金项目（编号:18ZR1430800）； 上海市教委高峰临床医学资助计划（编号:20181713）；
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目的:放射性直肠损伤是盆腔恶性肿瘤患者接受放射治疗的主要副作用之一。目前,关于放射性直肠损伤发生的机制尚不完全清楚。因此,本课题主要探讨照射后microRNA-122-5p（miR-122-5p）表达变化对放射性直肠损伤的影响机制。方法:收集直肠癌患者在放疗前与放疗后的外周血,并通过qRT-PCR技术检测血清中miR-122-5p的表达变化;进一步在C57BL/6小鼠放射性直肠损伤模型中验证miR-122-5p与放射性直肠损伤之间的关系。体外细胞水平通过转染miR-122-5p mimic以提高HIEC（human intestinal epithelial cell）细胞内miR-122-5p表达,然后通过克隆形成实验、流式细胞检测、线粒体膜电位检测、免疫荧光染色以及Western blot等实验探讨其对细胞放射敏感性及细胞凋亡的影响。进一步通过生物信息学网站预测和双荧光素酶实验验证miR-122-5p的下游靶基因,然后通过转染siRNA抑制靶基因表达,并研究其对放射敏感性和细胞凋亡的影响。体内动物水平首先通过尾静脉注射miR-122-5p antagomir抑制小鼠直肠组织内miR-122-5p表达,进一步通过H&E、TUNEL以及IHC染色等方法研究其对小鼠放射性直肠损伤的影响。结果:放疗后直肠癌患者血清中miR-122-5p表达水平显著升高。照射后小鼠直肠组织中的miR-122-5p表达水平也显著升高,并且与放射性直肠损伤程度成正相关。细胞实验表明,在照射情况下过表达miR-122-5p可显著增强HIEC细胞DNA损伤,降低克隆形成率,同时促进细胞凋亡。同时,研究结果表明CCAR1是miR-122-5p的下游靶基因,并且抑制CCAR1表达,在照射情况下HIEC细胞DNA损伤增强,克隆率显著降低,同时细胞凋亡增加。机制研究表明,在照射情况下过表达miR-122-5p或抑制CCAR1,p-CHK2的蛋白表达水平明显降低。动物实验表明,抑制小鼠直肠组织内的miR-122-5p表达后,放射导致的直肠损伤明显减轻,并且凋亡相关蛋白cl-caspase-3表达明显减少,而CCAR1和p-CHK2的表达明显升高。结论:照射可显著促进体内miR-122-5p表达。MiR-122-5p可能通过调控CCAR1/CHK2信号通路增强HIEC细胞放射敏感性,进而加重放射诱导的直肠损伤。
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