EphA7在骨肉瘤中的表达及对MG-63细胞生物学作用的研究

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背景与目的:EphA7是在机体正常功能活动中起着关键影响的膜蛋白,其经常发挥作用的场所是在细胞膜,但它在骨肉瘤中起着何种作用,还未被进行相关研究。因此本实验采取测定45例患者的骨肉瘤组织中EphA7的含量情况,并且通过相关的方法去探究EphA7是否对人骨肉瘤MG-63细胞的一些生物学作用产生影响。从而了解EphA7蛋白在骨肉瘤中所起的作用。方法:将45例骨肉瘤病人的骨肉瘤组织和对应的癌旁正常组织分别进行收集,然后放在液氮中储存。培养人骨肉瘤MG-63细胞,按照siRNA Reagent System试剂盒说明去转染人骨肉瘤MG-63细胞,并分成siRNA-EphA7组(EphA7-siRNA转染)、siRNA-Control组(阴性对照siRNA转染)和空白组(未转染)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)去测定组织中EphA7的mRNA表达情况,用蛋白质印迹法(Western blot)去测定细胞中EphA7的蛋白表达情况。采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)、细胞划痕实验、流式细胞术分别对细胞的增殖活力、细胞的迁移能力以及细胞的凋亡进行测定。结果:通过RTFQ-PCR和Western blot的测定结果显示,在骨肉瘤组织中EphA7的mRNA以及蛋白表达水平显著高于癌旁正常组织(P<0.05);与空白组和siRNA-Control组相比,siRNA-EphA7组中EphA7的mRNA表达和蛋白水平显著降低(P<0.05),空白组和siRNA-Control组相比较,两者EphA7的mRNA表达和蛋白水平无明显变化(P>0.05)。CCK-8测定结果显示,siRNA-EphA7组的吸光度(D)值显著低于空白组和siRNA-Control组(P<0.05),空白组和siRNA-Control组比较,吸光度(D)值无明显变化(P>0.05)。细胞划痕实验显示,与空白组和siRNA-Control组相比,siRNA-EphA7组划痕后的愈合率明显下降(P<0.05),空白组和siRNA-Control组相比,两者划痕后的愈合率无明显变化(P>0.05)。流式细胞术显示,与空白组和siRNA-Control组相比,siRNA-EphA7组凋亡率明显增加(P<0.05),空白组和siRNA-Control组相比较,两者凋亡率无明显变化(P>0.05)。结论:EphA7在正常机体中含量很低,但在骨肉瘤患者组织中EphA7的含量明显增高。下调人骨肉瘤MG-63细胞的EphA7表达可有效的限制人骨肉瘤MG-63细胞的增殖、迁移,促进其凋亡。
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