多不饱和脂肪酸(PUFA)系体内无法合成的必需脂肪酸，主要从食物中摄取，为细胞膜的组成成份，是前列腺素的前体物质，具有重要的生理功能。n-3多不饱和脂肪酸(n-3PUFA)，为大脑和视网膜发育的重要营养物质，对心血管疾病、关节炎和糖尿病等有明显的防治作用。动物实验及流行病学调查表明，n-3PUFA还具有明显的抗肿瘤作用，尤其对乳腺癌、直／结肠癌、前列腺癌和胰腺癌等有明显的抑制作用，是一种良好的化学预防制剂。相反，n-6多不饱和脂肪酸(n-6PUFA)则与多种肿瘤的发生和发展有关，主要与花生四烯酸(Arachidonic acid，AA)的衍生物前列腺素(Prostaglandins)、前列环素(Prostacyclins，PGI_s)、血栓素(Thromboxans，TX_s)、白三烯(Leukotienes，LT_s)生成增加有关。 n-3PUFA主要来自于鱼油等，主要包括α-亚麻酸(α-Linolenic acid，LNA)、二十碳五烯酸(Eicosapentaenoic acid，EPA)和二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic acid，DHA)。n-6PUFA主要来自于玉米油等，包括亚油酸(Linoleic acid，LA)、花生四烯酸(AA)、γ-亚麻酸(Gamma linolenic acid，GLA)、DH-γ-亚麻酸(Dihomo γ linolenic acid，DGLA)等。n-3PUFA和n-6PUFA不能相互转化，但共用相同的去饱和酶和延长酶，n-3PUFA对该类酶具有更强的亲和力，因此可以竞争性地抑制n-6PUFA的转化，降低AQA及AA下游产物类花生酸类物质(Eicosanoids)的合成，产生抗炎和抗肿瘤作用。 近年的研究表明，n-3PUFA可能通过多种途径抑制肿瘤细胞的生长和转移，包浙江大学硕士研究生学位论文括抑制环氧化酶一2(eyleooxygenase一2，COX一2)，抑制脂氧化酶(lipoxygenase，LOX)，增强脂质过氧化反应，干预B。1一2基因家族、Ras基因家族和AP一1基因家族等基因的表达，抗肿瘤新生血管，影响蛋白激酶和蛋白磷酸酶的表达，改变细胞周期调控系统和影响机体免疫功能等。 COX一2在许多肿瘤中表达增加，通过多种途径参与肿瘤的发生和发展，其中COX一2的主要产物PGEZ可促进细胞增殖，‘阻止细胞凋亡，促进新生血管形成，调节免疫抑制等。研究表明COX一2抑制剂可有效阻遏大肠癌、乳腺癌和胃癌等肿瘤的生长和增殖，是肿瘤防治的新靶点。n一3PUFA可抑制COX一2表达，竞争性抑制从生成PGE:等类花生酸类物质，是n一3PUFA抗肿瘤的作用机制之一。由此推断，n一3PUFA对于COX一2高表达的AGS细胞株可能有同样的抑制效应，本研究通过体外实验的方法对此进行了论证。1.D队对胃癌细胞株AGS增殖的影响 DHA系n一3PUEAs的一种，许多体内和体外实验研究表明DHA对多种肿瘤具有抑制效应，但目前关于DHA对胃癌细胞生长和增殖影响的研究报道较少。本实验采用唾哇蓝法(MTT法)检测在培养剂中添加不同浓度DHA来观察其对胃癌细胞株DHA增殖的影响。实验显示DHA在体外对胃癌细胞株AGS有明显的增殖抑制作用，而且呈现明显的量效和时效关系。而对AGs产生明显抑制作用的DHA浓度却未能在正常肠上皮上观察到。2.DHA诱导胃癌细胞株AGS凋亡 为进一步证明DHA是否诱导胃癌细胞株AGS凋亡，我们进行了DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测。实验结果表明，在经DHA孵育24h后，AGS细胞的DNA出现降解，产生180~200 bp或其整数倍的DNA片段，DNA琼脂糖电泳呈现特征性的梯形条带(DNA Ladder)。流式细胞仪检测显示经D队处理后AGS生长停滞于G0/G，期，出现显著凋亡峰。3.DHA下调胃癌细胞株AGS的COX一2表达 为进一步探讨DHA抑制胃癌细胞株AGS增殖和诱导凋亡的机制，我们进行了COX一2细胞免疫组织化学检测。结果显示，AGS细胞核膜及胞浆呈COX一2高表达，浙江大学硕士研究生学位论文经DHA孵育后，COX一2表达明显下调。据此，降低COX一2表达可能是OHA抑制AGS细胞增殖并诱导其凋亡的机制之一。结论1.DHA在体外对胃癌细胞株AGS有明显的增殖抑制作用，而且呈现明显的量效和 时效关系。2.D队可在体外诱导胃癌细胞株AGS凋亡。3.D队抑制AGS细胞增殖并诱导其凋亡可能与COX一2表达下调有关。