肾细胞癌(Renal Cell Carcinomar,RCC)是泌尿系统常见肿瘤,浸润生长和远处转移是晚期肾癌的重要特征,近1/3的肾癌患者首诊时已属晚期,40%的患者术后复发或转移,预后极差。肾透明细胞癌(Clear Cell Renal Cell Carcinoma)是肾细胞癌中最常见的病理类型,约占70%～80%,因此筛选和鉴定肾透明细胞癌转移相关基因,建立一套转移生物学标志,用于早期发现癌转移,对降低肾癌死亡率具有重要意义;而建立具有相同遗传背景的高、低转移细胞株是寻找和筛选转移相关基因的基础和关键。本研究分为3部分:一、原位移植建立人肾透明细胞癌裸鼠转移模型。二、体内外连续筛选建立高转移人肾透明细胞癌细胞亚系。三、人肾透明细胞癌不同转移潜能单克隆细胞株的建立及其生物学特性。 一、原位移植建立人肾透明细胞癌裸鼠转移模型 收集体外培养的对数生长期785-0细胞,进行裸鼠皮下注射,待皮下移植瘤长至直径为1.5cm左右时取出,以相同方法进行鼠间传代(每代2只),3～4代后取出移植瘤,剪成1mm~3大小进行肾包膜下原位接种,获人肾透明细胞癌裸鼠转移模型,即外科原位移植(Surgical Orthotopic Implantatidn,SOI)模型,裸鼠垂死时脱颈处死,取出肺脏转移灶体外培养,胰酶消化传代4～5次后即获得较纯的肾癌细胞,命名为786-OLM1。同时采用786-0细胞悬液进行肾包膜下原位注射,建立细胞原位注射(Cellular Orthotopic Injection,COI)模型,但肺脏未见转移灶。SOI模型的成瘤率和转移率均高于COI模型。 二、体内外连续筛选建立人肾透明细胞癌高转移细胞亚系 肿瘤转移异质性理论认为在肿瘤组织中存在着具有不同侵袭、转移能力的细胞亚群,而只有那些具有完成侵袭转移全过程能力(黏附能力、蛋白水解能力、细胞游走能力)的瘤细胞才能最终形成转移灶。因此可依据某些侵袭、转移有关因素的表达与否筛选出具有不同侵袭转移能力的瘤细胞。 Matrigel是一种从Engelborth-Holm-Swarm(EHS)小鼠肉瘤中提取的可溶