论文部分内容阅读
目的:细胞定向迁移是细胞修复的重要步骤,脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)拥有强大的自我更新及多向分化潜能,其移植是组织修复的潜在治疗手段。过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)对多种细胞的迁移有抑制作用,本实验为验证抑制PPARγ基因对ADSCs迁移能力的影响,通过PPARγ抑制剂BADGE作用于ADSCs,观察ADSCs迁移及增殖情况,检测与迁移相关的基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶9(MMP9)以及SDF/CXCR4通路相关蛋白胞内表达情况,探讨PPARγ对ADSCs迁移所起的作用,及可能的信号通路。实验方法:1、提取人ADSCs进行体外培养;2、分别用含有不同浓度的PPARγ抑制剂BADGE作用于ADSCs;3、根据实验目的分为三组:A组:ADSCs+25μm/LBADGE+普通培养液;B组:ADSCs+50μm/LBADGE+普通培养液;C组:ADSCs+普通培养液;4、划痕实验及Transwell观察ADSCs的迁移情况,PCR、Westernblot分别检测各组MMP2、MMP9、CXCR4基因及蛋白表达水平,CCK8法检测各组ADSCs增殖情况;5、统计学分析实验数据。实验结果:1、二维空间细胞迁移情况:在72h,普通培养液组迁移率约63%,25μm/L BADGE培养液组约43%,50μm/L BADGE培养液组约24%,与普通培养液组相比,抑制PPARγ基因,ADSCs迁移能力在二维空间下降(P<0.05);2、三维空间细胞迁移情况:24h时25μm/L及50μm/L BADGE培养液组ADSCs穿过小室的细胞数量较普通培养液组分别降低了14%和28%;3、抑制PPARγ基因后MMP2,MMP9,CXCR4的基因及其蛋白表达显著降低(P<0.05);4、各组ADSCs增殖状况:经过CCK-8测试,72h时50μm/L BADGE培养液组细胞数量较对照组减少78%,且具有统计学意义(P<0.05);25μm/L BADGE培养液组72h细胞数值与普通培养液组相比减少40%,具有统计学意义(P<0.05);50μm/L BADGE培养液组72h数值与25μm/L BADGE培养液组相比减少63%,具有统计学意义(P<0.05)。结论:抑制PPARγ基因后ADSCs的迁移能力下降;这种抑制作用随抑制剂浓度增加而增加。