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近些年来,乳腺肿瘤已经成为常见且对犬类健康危害非常严重的一种疾病之一。能量代谢在肿瘤生长、转移过程中发挥着重要的作用,不同性质的肿瘤以及同一肿瘤内不同部位能量代谢不同。能量代谢途径是目前肿瘤治疗、诊断的关注点之一。犬乳腺肿瘤能量代谢研究很少,尤其对于不同恶性程度的犬乳腺肿瘤以及同一肿瘤不同区域的能量代谢情况的研究尚未见报道。所以本实验以临床收集到的犬乳腺肿瘤病例为对象,开展肿瘤能量代谢方面的研究。按照国际通用的TNM乳腺肿瘤分级方法,乳腺肿瘤可分为4级。本实验对半年内收集到的10例未经任何治疗的Ⅰ级、Ⅱ级犬乳腺肿瘤进行了研究,比较这两类乳腺肿瘤中心、边缘及周边健康组织内的恶性程度及能量代谢差异,进而将能量代谢相关因子作为指标判定Ⅰ级、Ⅱ级犬乳腺肿瘤的依据,并进一步为Ⅰ级、Ⅱ级犬乳腺肿瘤诊断和治疗提供参考。本试验于半年时间内,在哈尔滨市某宠物医院收集了5例Ⅰ级、5例Ⅱ级乳腺肿瘤患犬的病例,对其中数量充足并具有统计学意义的Ⅰ级、Ⅱ级乳腺肿瘤样本进行实验,首先利用HE染色切片结合TNM肿瘤分期系统对肿瘤恶性分级;10个肿瘤依据恶性程度分为两组:（1）Ⅰ级乳腺肿瘤组（n=5）;（2）Ⅱ级乳腺肿瘤组（n=5）。再分别取每个瘤的中心、边缘、周边健康组织,利用Western Blot技术检测癌基因以及抑癌基因（c-myc、p53）的表达水平;线粒体分裂与融合相关指标:（Mfn2、Drp1）,利用ELISA试剂盒检测肿瘤内代谢能力（ATP合酶、乳酸脱氢酶）;能量感受器通路相关指标（AMPK、P-AMPK、PGC-1α、GLUT4）;利用免疫组织化学染色技术检测肿瘤缺氧指标（HIF-1α）;随后选取ELISA试剂盒检测的指标（ATP合酶、乳酸脱氢酶）应用于临床诊断。实验结果显示:患犬基本信息统计结果:Ⅰ级乳腺肿瘤组最大年龄为10岁,最小年龄为4岁,平均年龄为7岁;Ⅱ级乳腺肿瘤组均为10岁以上的老年犬,最大年龄为15岁,最小年龄为10岁,平均年龄为12岁。在肿瘤手术摘除前,均未做任何治疗。10例患病犬均为未绝育母犬,就诊时,除乳腺肿瘤外,患犬还会出现其他临床症状如:精神沉郁、体温升高、食欲减退、发情期延长、呕吐等;4只患病犬出现多个乳腺肿瘤,其余6只仅有1个乳腺肿瘤。6只患犬在发情期后肿瘤增长明显,其余4只未出现该症状。血常规结果提示部分患犬炎症因子高表达、血小板升高;生化检测结果患犬具有球蛋白升高,且伴随尿素氮、磷偏低。10例病犬,其中5例为Ⅰ级乳腺肿瘤,肿瘤组织与周围组织具有明显的界限;镜下观察肿瘤细胞呈柱状或立方上皮外观,多数为1个不明显核仁,低-中度异质性,核分裂象小于30个/10 HPF,未见肿瘤细胞侵袭脉管组织;Ⅱ级乳腺肿瘤5例,肿瘤组织与周围组织无明显界限,无包囊,镜下观察肿瘤呈柱状或立方外观,细胞核浓染-淡明,多为1个小而不明显的核仁,中度-高度异型性,异常核分裂象大于30个/10 HPF。肿瘤恶性程度指标:癌基因（c-myc）、抑癌基因:（p53）,c-myc在乳腺肿瘤Ⅰ级相较于Ⅱ级表达量低,肿瘤中心、边缘、健康组织表达量依次下降,p53在Ⅰ级乳腺肿瘤相较于Ⅱ级表达量低,肿瘤中心、边缘、健康组织表达量依次下降;线粒体融合分裂指标:线粒体融合指标（Mfn2）,线粒体分裂指标（Drp1）,Mfn2在Ⅰ级乳腺肿瘤相较于Ⅱ级表达量高,肿瘤中心、边缘、健康组织表达量依次上升,Drp1在Ⅰ级乳腺肿瘤相较于Ⅱ级表达量低,肿瘤中心、边缘、健康组织表达量依次下降;肿瘤氧化磷酸化的能量感受器信号通路（AMPK、PGC-1α）,Ⅰ级乳腺肿瘤相较于Ⅱ级表达量低,肿瘤中心、边缘、健康组织表达量依次下降,p-AMPK乳腺肿瘤Ⅰ级相较于Ⅱ级表达量低,肿瘤中心、边缘、健康组织表达量依次上高;肿瘤糖酵解指标乳酸脱氢酶含量、氧感应转录因子（HIF-1α）,乳腺肿瘤Ⅰ级相较于Ⅱ级表达量低,肿瘤中心、边缘、健康组织表达量依次下降;肿瘤能量指标:ATP合酶、葡萄糖转运指标（GLUT4）,ATP合酶在乳腺肿瘤Ⅰ级相较于Ⅱ级含量高,肿瘤中心、边缘、健康组织含量依次下降,GLUT4在乳腺肿瘤Ⅰ级相较于Ⅱ级表达量低,肿瘤中心、边缘、健康组织表达量依次升高。将对ATP合酶和乳酸脱氢酶的检测应用于临床,对13例Ⅰ级犬乳腺肿瘤和19例Ⅱ级犬乳腺肿瘤进行检测,健康区域乳酸脱氢酶含量小于4.48ng/m L;肿瘤中乳酸脱氢酶含量大于4.75 ng/m L;Ⅰ级犬乳腺肿瘤的ATP合酶含量在中心区与周边健康区含量的差值小于194.28 pg/m L,大于131.68 pg/m L。乳酸脱氢酶含量在中心区与周边健康区的差值小于6.53 ng/m L,大于3.05 ng/m L;Ⅱ级犬乳腺肿瘤的ATP合酶含量在中心区与周边健康区含量的差值小于24.99 pg/m L。乳酸脱氢酶含量在中心区与周边健康区的差值小于13.18 ng/m L,大于6.8 ng/m L。研究结果表明:犬乳腺肿瘤中心恶性程度最大的区域,能量需求被满足的程度最高,犬乳腺肿瘤外周健康区,能量需求被满足的程度最低。犬乳腺肿瘤中心区能量得到满足的原因于线粒体功能最强,氧化磷酸化水平最高,糖酵解水平最高有关。I级犬乳腺肿瘤更依赖与有氧呼吸（氧化磷酸化）,而Ⅱ级犬乳腺更依赖与糖酵解。本研究初步表明,通过检测犬乳腺肿瘤氧化磷酸化能力和糖酵解能力的强弱作为判断肿瘤恶性程度具有一定的可行性。