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目的:姜黄素(curcumin,CUR)是中药姜黄的主要活性成分,是一种脂溶性酚类色素,具有抗肿瘤、抗炎症、抑制突变等多种作用。小剂量顺铂(DDP)与5-氟尿嘧啶(5-FU)联合用药(L-FP)是临床上治疗胃癌的常用化疗方案。本文旨在探讨姜黄素联合L-FP对体外培养的胃癌MGC-803细胞的生长、增殖、迁移和凋亡的影响及其机制,为临床上联合应用姜黄素和L-FP治疗胃癌提供理论基础和实验依据。方法:采用细胞生物学和分子生物学的研究技术与方法,观察姜黄素和/或不同剂量的L-FP对体外培养的胃癌MGC-803细胞的生长、克隆形成、迁移、细胞周期、细胞凋亡的作用以及对相关调控蛋白Caspase-3、Caspase-8、Bax和Bcl-2的影响。主要观察指标及方法如下:1.MTT实验:用姜黄素和/或不同剂量的L-FP分别处理96孔板培养的胃癌MGC-803细胞24h、48h和72h后,使用酶标仪检测每孔细胞的OD值,并计算细胞的生长抑制率。2.平板克隆形成实验:用姜黄素和/或不同剂量的L-FP处理6孔板培养的MGC-803细胞,24h后换不含药物的培养液继续培养10天,吉姆萨染色后计数并计算克隆形成率。3.Transwell迁移实验:用含有姜黄素和/或不同剂量的L-FP的培养液培养Transwell小室中的胃癌MGC-803细胞,10h后,MTT方法检测并计算迁移率。4.AO/EB双染法:用姜黄素和/或不同剂量的L-FP处理6孔板培养的MGC-803细胞24h后,AO/EB双染在荧光显微镜下拍照,观察细胞形态、计数凋亡细胞数并计算凋亡率。5.流式细胞术:姜黄素和/或不同剂量的L-FP处理6孔板培养的胃癌MGC-803细胞24h后,用PI单染方法检测细胞周期;用Annexin V-FITC/PI双染方法检测细胞凋亡。6.酶标仪比色法:用姜黄素和/或不同剂量的L-FP处理6孔板培养的 MGC-803细胞24h后,用酶标仪比色法检测Caspase-3和Caspase-8的活性,并计算其相对活性。7.Western blot方法:用姜黄素和/或不同剂量的L-FP处理6孔板培养的MGC-803细胞24h后,提取总蛋白,用Western blot法检测Bax和Bcl-2的表达。结果:1.姜黄素联合不同剂量的L-FP对体外培养的胃癌MGC-803细胞生长的影响:用姜黄素和/或不同剂量的L-FP处理胃癌MGC-803细胞24h、48h和72h后,与对照组相比,各实验组均表现出了显著的抑制生长效应(*P<0.05或**P<0.01或***P<0.001);其中药物处理24h和72h的抑制率,姜黄素联合低剂量L-FP组与中剂量L-FP组相比和姜黄素联合中剂量L-FP组与高剂量L-FP组相比,无显著性差异(P>0.05);而48h的抑制率,姜黄素联合L-FP组显著高于姜黄素或L-FP单用组(*P<0.05)。2.姜黄素联合不同剂量的L-FP对体外培养的胃癌MGC-803细胞克隆形成的影响:与对照组相比,各实验组细胞的克隆形成能力均显著下降(*P<0.05);并且姜黄素联合L-FP组抑制率显著高于姜黄素或L-FP单用组(*P<0.05)。3.姜黄素联合不同剂量的L-FP对体外培养的胃癌MGC-803细胞迁移的影响:与对照组相比,各实验组通过Transwell小室的细胞量明显降低(*P<0.05或**P<0.01);其中姜黄素联合L-FP组迁移率与姜黄素或L-FP单用组无显著差异(P>0.05)。4.姜黄素联合不同剂量的L-FP对体外培养的胃癌MGC-803细胞周期的影响:与对照组相比,各实验组主要阻滞细胞于S期(*P<0.05),而且姜黄素联合L-FP组细胞在S期所占比例显著高于姜黄素或L-FP单用组(*P<0.05)。5.姜黄素联合不同剂量的L-FP对体外培养的胃癌MGC-803细胞凋亡的影响:与对照组相比,各实验组均能显著诱导MGC-803细胞发生凋亡(*P<0.05),其中姜黄素联合L-FP组的凋亡率显著高于姜黄素或L-FP单用组(*P<0.05),并且Annexin-V/PI双染流式细胞仪检测的各组细胞凋亡率与AO/EB双染荧光显微镜检测的各组细胞凋亡率没有显著差异(P>0.05)。6.姜黄素联合不同剂量的L-FP对体外培养的胃癌MGC-803细胞相关调控蛋白的影响:与对照组相比,各实验组细胞显著增强了Bax的表达,降低了Bcl-2的表达,提高了Caspase-3和Caspase-8的活性(*P<0.05或**P<0.01);除了姜黄素联合中剂量L-FP组的Bax相对表达量与高剂量L-FP单用组无显著差异(P>0.05),其余姜黄素联合L-FP组的Bax相对表达量显著高于姜黄素或L-FP单用组,Bcl-2相对表达量显著低于姜黄素或L-FP单用组(*P<0.05或**P<0.01);姜黄素联合低剂量L-FP组的Caspase-3和Caspase-8相对活性与中剂量L-FP单用组无显著差异(P>0.05),而姜黄素联合中剂量L-FP组的Caspase-3和Caspase-8相对活性显著高于高剂量L-FP单用组(*P<0.05或**P<0.01)。结论:1.姜黄素能增强L-FP对体外培养的胃癌MGC-803细胞的生长抑制作用。2.姜黄素能增强L-FP对体外培养的胃癌MGC-803细胞克隆形成和迁移能力的抑制作用。3.姜黄素能增强L-FP对体外培养的胃癌MGC-803细胞周期中S期的阻滞作用。4.姜黄素能增强L-FP对体外培养的胃癌MGC-803细胞凋亡的诱导作用,其机制与抑制Bcl-2表达、促进Bax表达和提高Caspase-3和Caspase-8活性有关。对于细胞凋亡的检测而言,Annexin-V/PI双染流式细胞仪检测方法与AO/EB双染荧光显微镜检测方法的结果无显著性差异。